母裂解酶-100T來自藤黃節(jié)桿菌（現(xiàn)貨促銷）

Zymolyase-100T From Arthrobacter luteus

-----MP Biomedicals New Zealand Limited

簡述：

 

   Zymolyase-20T（酵母裂解酶-20T）是通過Arthrobacter luteus(藤黃節(jié)桿菌)深層培養(yǎng)獲得的酶制劑，它能有效的裂解活酵母細(xì)胞細(xì)胞壁。該制劑是利用親和層析法部分純化獲得的凍干酶，其酶活單位是100,000 單位/g.其中主要負(fù)責(zé)裂解活酵母細(xì)胞的酶成分是ß-1,3-葡聚糖昆布五糖水解酶，通過對ß-1,3-葡聚糖連接位水解葡萄糖聚合物，釋放產(chǎn)物主要是昆布五糖。

產(chǎn)品說明：

單位定義：800nm條件下菌液吸光度下降30%，表示一個活力單位。

特異性：此產(chǎn)品的裂解譜包括以下屬的生物：Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloekera, Kluyveromyces, Lipomyces, Metschikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomcopsis, Saccharomycodes, Schwannimomyces and others.

用途:可用于細(xì)胞裂解、原生質(zhì)球形成及葡聚糖水解。

說明:酵母細(xì)胞的裂解程度隨酵母菌的種類、生長階段及培養(yǎng)條件而改變。

聲明: Zymolyase是麒麟麥酒股份有限公司（Kirin Brewery Co., Ltd）的注冊商標(biāo)。

儲存:凍干狀態(tài)于2-8°C中保存，若30°C下放置3個月約失去90%活力。

外觀:凍干粉

活力：100,000單位/g

核心酶：ß-1,3-葡聚糖昆布五糖水解酶

其他酶: ß-1,3-葡聚糖酶，約1.0 x 10⁷ 單位 /g

         蛋白酶，約1.7 x 10⁴單位 /g

甘露聚糖酶, 約6.0 x 10⁴單位 /g

 淀粉酶，木聚糖酶，***酶，微量DNase及Rnase（未檢出）

催化劑：二硫蘇糖醇（DTT）, ß-巰基乙醇及其他的巰基化合物（如半胱氨酸）

最適pH及溫度：

     pH 7.5, 35°C裂解活酵母細(xì)胞

     pH 6.5, 45°C水解酵母葡聚糖

pH范圍：pH 5-10間保持穩(wěn)定

熱穩(wěn)定性：60°C，5min喪失細(xì)胞溶解能力

警告：（1）Zymolase^Ø-100T溶解度低，以懸浮液的狀態(tài)使用。如果需制備濃度超過0.05%的無菌酶溶液，則通過將Zymolase^Ø-100T溶解在含5%葡萄糖的緩沖液中（pH 7.5），首先配制2%的酶儲存液；（2）吸取懸浮液，留下沉至容器管底的任何物質(zhì)；（3）不推薦使用**纖維過濾器；（4）稀釋無菌的酶懸浮液至目標(biāo)濃度。

原生質(zhì)球制備程序：

 

1.      室溫條件，5000rpm（3000 xg），5min離心酵母培養(yǎng)物；

2.      收集離心沉淀物（酵母細(xì)胞）并記錄濕重；

3.      用TE緩沖液懸浮細(xì)胞，加入量為1.4ml/g濕重細(xì)胞；（TE緩沖液配方：100 mM Tris [MP 8196231]，pH 8.0，100 mM EDTA [MP195173]）

4.      雙蒸水快速定容，終體積量為3.5ml/g濕重細(xì)胞；

5.      按照17.5 ul (總體積的1/200)/ g濕重細(xì)胞的量加入ß -巰基乙醇（MP 806445），目的是為了除去細(xì)胞外層中的甘露聚糖層；

6.      30°C輕搖溫育混合液，處于對數(shù)期生長的培養(yǎng)物處理15min，處于穩(wěn)定期生長的培養(yǎng)物處理45min；

7.      室溫條件，5000rpm離心5min；

8.      用S緩沖液重新懸浮細(xì)胞，加入量為4.0ml/g濕重細(xì)胞；（S緩沖液配方：1.0 M 山梨糖[MP 102938]，10 mM PIPES (MP 190257), pH 6.5）

9.      5000rpm離心5min；

10.   再次用S緩沖液（4.0ml/g濕重細(xì)胞）懸浮細(xì)胞，另外加入Zymolyases（50U /g濕重細(xì)胞）；如果Zymolyases配制成附錄所示的溶液，則添加250ul即可。最好根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況最先優(yōu)化酶使用量。

11.   30°C輕搖溫育混合液30min，根據(jù)以下方式監(jiān)測原生質(zhì)球形成程度：

（1）         加1ul樣品到20ul S 緩沖液內(nèi)，原生質(zhì)球應(yīng)該保持完整；

（2）         加1ul樣品到20ul雙蒸水中，原生質(zhì)球應(yīng)該破裂；顯微鏡下觀察比較兩個樣品的形態(tài)差異。

12．一般情況下反應(yīng)45-60min，原生質(zhì)球的形成量>90%，此時4^oC下離心收集細(xì)胞，5000rpm，5min；

13. 再次用S緩沖液（2 ml/g濕重細(xì)胞）懸浮原生質(zhì)球，5000rpm離心5min；重復(fù)此步驟做第二次清洗；；

14.原生質(zhì)球離心沉淀物-70^oC凍存。

裂解原生質(zhì)球獲取細(xì)胞核：

   溫和的裂解原生質(zhì)球方法如下; 用3倍體積的18%Ficoll（MP 160003）溶液懸浮細(xì)胞離心沉淀物，Ficoll溶解于含有0.5 mM CaCl₂ (MP 195088)的10 mM PIPES 緩沖液內(nèi)，pH 6.5。

酵母菌基因組DNA的制備：

 以下步驟快捷，適合于從少量酵母培養(yǎng)物中制備基因組DNA ：

1.     將過夜培養(yǎng)的10ml酵母菌培養(yǎng)物離心收集細(xì)胞，加入280ul TE Buffer（配方見原生質(zhì)球制備程序中的步驟3），300 ul雙蒸水，3 ul ß -巰基乙醇（MP 806445）；

2.     30^oC溫育45min；

3.     以臺式離心機(jī)的最高速度離心2-3s，棄上清液，沉淀物用500 ul S 緩沖液（配方見原生質(zhì)球制備程序中的步驟8）懸浮.；再次離心棄上清；

4.     用500 ul含有1 mg/ml Zymolyase 20T（MP 32-092-1）的S緩沖液懸浮細(xì)胞沉淀物（或者使用自己認(rèn)為最合適的酶濃度）；

5.     30^oC溫育1小時；

 

6.     重復(fù)步驟3；

7.     用200 ul含有0.1%SDS（MP 190522）和2ug蛋白酶K (MP 809252)的TE 緩沖液懸浮細(xì)胞沉淀物；

8.     37^oC溫育3小時，不時的混勻溶液；

9.     調(diào)水浴鍋的溫度至65^oC，并溫育20min；

10. 從水浴鍋內(nèi)取出并冷卻至室溫；

11. 用200ul 1:1的Tris飽和酚-氯仿混合液萃取，漩渦混勻并離心；從離心機(jī)內(nèi)取出并保留上清液；

12. 用200ul氯仿萃取上清液，之后重復(fù)漩渦混勻及離心；

13. 加入500ul95%乙醇到上清液內(nèi)，20^oC沉淀10min；

14.  4^oC下，15,000 xg離心20 min；

15. 自然風(fēng)干或者于真空離心蒸發(fā)濃縮器內(nèi)晾干除去多余的乙醇，并加入200ul TE緩沖液（含有150 mM NaCl和1 ug核糖核酸酶A (MP 101076)）溶解DNA;

16.  37^oC溫育1小時；

17. 重復(fù)步驟11和12；

18. 加入2.5倍體積的95%乙醇，20^oC沉淀10min；

19.  30ul雙蒸水重懸DNA。對1:500的DNA稀釋液測量A₂₆₀，根據(jù)消光系數(shù)計(jì)算DNA產(chǎn)量；

20. 產(chǎn)量大約為40-50ug。

附錄:

制備Zymolyase 100T溶液：

以下配制的溶液適用于該產(chǎn)品的實(shí)驗(yàn)程序中（但并不排除其他類型的母液也適用）

配制200單位/ml的母液，將凍干粉溶于已高壓滅菌的S緩沖液（配方見原生質(zhì)球制備程序中的步驟8）。

如果不被微生物污染，于4 ^oC下，此母液能2個星期以上時間內(nèi)保持高效；

參考文獻(xiàn)：

1.      Kaneko, T., Kitamura, K. and Yamamoto, Y., J. Gen. Appl. Microbiol. 15, 317, 1969.

2.      Kitamura, K., Kaneko, T. and Yamamoto, Y., Arch Biochem. Biophys. 145, 402, 1971.

3.      Kitamura, K. Kaneko, T. and Yamamoto, Y., J. Gen Appl. Microbiol. 18, 57, 1972.

4.      Kitamura, K. and Yamamoto, Y., Arch. Biochem. Biophys. 153, 403, 1972.

5.      Kaneko, T., Kitamura, K. and Yamamoto, Y., Agric. Biol. Chem. 37, 2295, 1973.

6.      Kitamura, K., Kaneko, T. and Yamamoto, Y., J. Gen. Appl. Microbiol. 20, 323, 1974.

7.      Kitamura, K. and Yamamoto, Y., Agric. Biol. Chem. 45, 1761, 1981.

8.      Kitamura, K. and Tanabe, K., Agric. Biol.Chem. 46, 553, 1982.

9.      Kitamura, K., J. Ferment. Technol. 60, 257, 1982.

10.   Kitamura, K., Agric. Biol. Chem. 46, 963, 1982.

11.   Kitamura, K., Agric. Biol. Chem. 46, 2093, 1982.

12.   Calza, R.E., Schroeder, A.L., J. Gen. Microbiol. 129, 413, 1983.

13.   Iizuka Masaru, Torii Yasuhiko, Yamamoto Takehiko, Agric. Biol. Chem. 47 (12), 2767, 1983.

14.   Shibata Nobuyuki, Kobayashi Hidemitsu, Tojo Minehiro, Suzuki Shigeo, Arch. Biochem. Biophys. 251 (2), 697, 1986.

15.   Iijima, Y., Yanagi, S.O., Agric. Biol. Chem. 50 (7), 1855, 1986.

16.   Herrero Enrique, Sanz Pascual. Sentandreu Rafael, J. Gen. Microbiol. 133 (10), 2895, 1987.

17.   Eisele, H., et. al., J. Clin. Microbiology, Dec. 1997.

08320921	320921	Zymolyase 20T	1 g	3841.00
08320931	320931	ZYMOLYASE 100T	500 mg	16128.00
08320932	320932	ZYMOLYASE 100T	250 mg	9898.00

 

廠家說明：

MP Biomedicals生物醫(yī)學(xué)公司是位于美國加利福尼亞州的知名生命科學(xué)和生物技術(shù)廠商。2004年底成功收購Qbiogene、ICN，現(xiàn)在全球有5個大型倉庫，能夠及時供應(yīng)各行業(yè)需求，亞洲倉庫位于新加坡。它致力于生命科學(xué)領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究和探索。目前它提供55000多種產(chǎn)品，是世界上能全面提供生命科學(xué)產(chǎn)品和臨床診斷產(chǎn)品的幾家廠商之一。

北京畢特博生物技術(shù)有限責(zé)任公司是此美國MPBIO的代理商，同時經(jīng)營此品牌已有年的歷史了。

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