重組腺病毒/慢病毒構(gòu)建包裝服務(wù)
為促進(jìn)國(guó)內(nèi)相關(guān)領(lǐng)域的研究進(jìn)展,上海閃晶分子生物科技有限公司從2008年開(kāi)始,對(duì)國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展重組腺病毒/慢病毒構(gòu)建,包裝及擴(kuò)增服務(wù),可以由客戶(hù)提供自己的基因,完成腺病毒/慢病毒構(gòu)建,鑒定,包裝的服務(wù).我們的宗旨是:“專(zhuān)業(yè)公司,打造專(zhuān)業(yè)服務(wù)”
一. 技術(shù)路線(xiàn):
(一) A.  腺病毒載體構(gòu)建:
本系統(tǒng)是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA為架,在克隆,包裝,擴(kuò)增等各部條件做了改進(jìn)和優(yōu)化,達(dá)到了克隆陽(yáng)性率更高,質(zhì)量更可靠,包裝穩(wěn)定,出毒迅速,滴度高等效果.在此基礎(chǔ)上,還拓展了更廣泛的應(yīng)用,可以提供各種帶報(bào)告基因的,帶不同標(biāo)簽的腺病毒構(gòu)建和包裝服務(wù).所包裝的腺病毒已成功應(yīng)用于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),基因轉(zhuǎn)位,Co-IP,干細(xì)胞研究等科研實(shí)驗(yàn).并且可以完成較高難度的克隆構(gòu)建,包括具有細(xì)胞毒性作用基因的腺病毒構(gòu)建,在短時(shí)間內(nèi)完成從原始質(zhì)粒到病毒DAN的構(gòu)建工作.
B.慢病毒載體構(gòu)建
慢病毒(Lent Virus)載體是以HIV-1(人類(lèi)免疫缺陷I型病毒)為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的基因治療載體,該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,達(dá)到持久性表達(dá)的效果.可有效地感染神經(jīng)元肝細(xì)胞,心肌細(xì)胞,腫瘤細(xì)胞,內(nèi)皮細(xì)胞,干細(xì)胞等多種類(lèi)型的細(xì)胞,效果非常理想,因此具有廣闊的應(yīng)用前景.
(二) 病毒包裝、擴(kuò)增:
1.) 將鑒定正確的基因克隆到慢病毒載體,與輔助載體一起轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行包裝;
2.) 將包裝好的病毒超速離心收集;
3.) 將濃縮病毒進(jìn)行滴定,滴定結(jié)果單位為PFU/ml(一般為5*108PFU/ml以上,體積為500μl以上,根據(jù)客戶(hù)需要,不同量有價(jià)格差異)
二、質(zhì)量控制與鑒定:
1.)測(cè)序鑒定
2.)根據(jù)特定引物作RT-PCR鑒定
3.)蛋白表達(dá)鑒定(根據(jù)客戶(hù)要求并由客戶(hù)提供高特異性抗體)
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