SYBR Green I Master Mix  

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本產(chǎn)品為基于HotStart Taq Polymerase 的熒光檢測(cè)定量PCR即用反應(yīng)液。 
1、使用簡(jiǎn)便：除本品外，只需再加入樣品/引物/探針使成欲達(dá)體系即可開始使用。 

2、廣泛的應(yīng)用性： 可用于MJ/BIO-RAD 儀器 

3、可實(shí)施熱啟動(dòng)PCR：  本產(chǎn)品內(nèi)含優(yōu)質(zhì)高效的熱啟動(dòng)Taq 酶，無需特別操作即可進(jìn)行熱啟動(dòng)PCR。

 
●試劑盒特長(zhǎng)
1． 適用于Real Time PCR反應(yīng)，可以快速正確地對(duì)目的基因進(jìn)行檢測(cè)、定量。

2． 在1×濃度的Premix中，預(yù)先混有SYBR GreenI，PCR反應(yīng)液配制時(shí)，只需加入模板、引物、滅菌蒸餾水便可進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)，操作簡(jiǎn)單方便。
 
●操作注意
1． 凍結(jié)制品融解后請(qǐng)上下顛倒輕輕均勻混合，避免振蕩器等劇烈攪拌?；靹蛑破泛笳?qǐng)用離心機(jī)輕微離心后使用。

2． 本制品使用前請(qǐng)于-20℃保存，融解后的制品請(qǐng)于冰上放置，使用后請(qǐng)立即保存于-20℃。注意：使用及保存均需避光。

3． 盡量避免多次反復(fù)凍融，如果需要多次使用時(shí)，請(qǐng)?jiān)诘谝淮稳诮夂髮⒅破钒催m當(dāng)量分裝后保存。

4． 本制品中含有熒光染料SYBR Green I，保存制品時(shí)或配制PCR反應(yīng)液時(shí)請(qǐng)避免強(qiáng)光照射。

5． 反應(yīng)液的配制、分裝請(qǐng)一定使用新的（無污染的）槍頭、Microtube等，盡量避免污染。
 
●Real Time PCR操作順序
1． 溶解試劑，上下顛倒混勻，確認(rèn)溶液完全溶解。
注）避免用振蕩器混勻，劇烈振蕩會(huì)降低制品性能。
以下操作請(qǐng)?jiān)诒线M(jìn)行，長(zhǎng)時(shí)間室溫放置會(huì)降低制品性能。 

2． 配制PCR反應(yīng)用混合液，分裝至PCR反應(yīng)管中。

3． 添加PCR擴(kuò)增用模板。

4． 使用Real Time PCR擴(kuò)增儀，進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

注）1. 反應(yīng)液配制方法和PCR擴(kuò)增條件請(qǐng)參照使用方法。
    2. Real Time PCR儀的使用方法，請(qǐng)參照各種儀器說明書。
   
    
●使用方法
A）應(yīng)用ABI PRISM 7000，7700，7900 Real Time PCR擴(kuò)增儀的使用方法
※ 請(qǐng)按照ABI PRISM?（Applied Biosystems公司）的使用說明書要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

1． 按下列組份配制PCR反應(yīng)液（反應(yīng)液配制請(qǐng)?jiān)诒线M(jìn)行）。
PCR mix                 46.0μL
上游引物                  1.0μL
下游引物                  1.0μL
模板                         2.0μL
 
注意：1）、通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時(shí)，可以在0.1～1.0μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
2）、DNA模板的添加量通常在100 ng以下。因不同種類的DNA模板的溶液中含有的靶基因的拷貝數(shù)不同，必要時(shí)可進(jìn)行梯度稀釋，確定最佳的DNA模板添加量。

2. 進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)。
建議采用兩步法PCR反應(yīng)程序，如果該程序得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，再進(jìn)行PCR條件的優(yōu)化。由于使用Tm值較低的引物等原因，兩步法PCR反應(yīng)擴(kuò)增性能較差時(shí)，可以嘗試進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
 
B）應(yīng)用Light Cycler Real Time PCR擴(kuò)增儀的使用方法
※ 請(qǐng)按照LightCycler?（Roche Diagnostics公司）的使用說明書要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。
 
1．按下列組份配制PCR反應(yīng)液（反應(yīng)液配制請(qǐng)?jiān)诒线M(jìn)行）。
  
PCR mix                  16.0μL
上游引物                  1.0μL
下游引物                  1.0μL
模板                         2.0μL
 
注意：*1、通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時(shí)，可以在0.1～1.0μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
*2、DNA模板的添加量通常在100 ng以下。因不同種類的DNA模板的溶液中含有的靶基因的拷貝數(shù)不同，必要時(shí)可進(jìn)行梯度稀釋，確定最佳的DNA模板添加量。
 
2. 進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)。

PCR反應(yīng)用毛細(xì)管請(qǐng)用離心機(jī)輕輕離心后放入Light Cycler中進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)。建議采用兩步法PCR反應(yīng)程序，如果該程序得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，再進(jìn)行PCR條件的優(yōu)化。由于使用Tm值較低的引物等原因，兩步法PCR反應(yīng)擴(kuò)增性能較差時(shí)，可以嘗試進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
 
 
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