色譜法是利用混合物中各組分的不同的物理或化學(xué)性質(zhì)達(dá)到分離的目的。分離后的組分可以進(jìn)行定性或定量分析，有時分離和測定同時進(jìn)行，有時先分離后測定。色譜法包括氣相色譜法和液相色譜法等。
　　
　　在氣相色譜分析中，要快速、有效的分析一個復(fù)雜樣品，關(guān)鍵的問題是要選擇出一根好的色譜柱進(jìn)行分離，并對柱操作條件進(jìn)行選擇。
　　
　　色譜柱的選擇直接影響到分析的可靠性。色譜柱的選擇包括：選擇填充柱還是選擇毛細(xì)管柱；選擇什么樣的固定相，如何制備填充色譜柱。色譜操作條件的選擇直接影響到分析的結(jié)果，操作條件包括：檢測器的選擇、氣體種類和流量、柱溫及檢測器溫度、電極電壓、樣品的制備、進(jìn)樣量和時間等。
　　
　　(一)色譜柱
　　
　　1．色譜柱
　　
　　總的來說，色譜柱(簡稱柱子)形狀、柱內(nèi)徑、柱長均可影響柱效率。柱形不同，柱效率不一樣，一般螺旋形和盤形柱的柱效率較高，而且體積較小，為一般儀器所常用。
　　
　　填充柱的柱內(nèi)徑過小，易造成填充困難和柱壓降增加，給操作帶來麻煩，故一般選擇柱內(nèi)徑3～4mm。柱子長些，一般柱效率高，但柱子太長，柱壓降也增大，保留時間延長，甚至出現(xiàn)扁平峰，使柱效下降。柱長選擇通常以使組分能完全分離，分離度(R≥1.5，兩組分完全分離；R＝1.2基本分開；R＜1沒有分開)能達(dá)到所期望的值為準(zhǔn)。因此，常用的填充柱長度為1～2m。毛細(xì)管柱多為盤形柱，柱內(nèi)徑一般0.1～0.5mm，柱長一般幾十米至上百米。毛細(xì)管柱與填充柱相比，分離效率高、色譜峰形窄、分析速度快、樣品用量少、不同組分容易分開、適于復(fù)雜混合物的分析。其缺點是：樣品負(fù)荷量小，因此，經(jīng)常需要采用分流技術(shù)，對微小組分的分析不利，定量分析的重現(xiàn)性也不如填充柱好。在進(jìn)行色譜分析時，可根據(jù)樣品的情況選擇色譜柱類型。若欲分析測定混合樣品中苯、甲苯、乙苯的含量，選擇3mm內(nèi)徑、2m長的盤形填充柱即可。
　　
　　2．固定相
　　
　　固定相分為固體固定相和液體固定相兩種。固體固定相一般采用固體吸附劑。其特點是吸附容量大、熱穩(wěn)定性好、價格便宜，但柱效低，吸附活性中心易中毒，因此使用前要進(jìn)行活化處理，然后方可裝柱使用。固體固定相主要用于惰性氣體、H2、O2、N2、CO、CO2和CH4等一般氣體和低沸點有機(jī)物的分析。氣相色譜常用的固體固定相見表1。液體固定相是將固定液均勻地涂在擔(dān)體上制成的。擔(dān)體(載體)的表面和孔結(jié)構(gòu)決定了固定液在載體上的分布和樣品分子在載體孔中的擴(kuò)散。擔(dān)體的作用是提供一個具有較大表面積的惰性表面，以保證固定液在擔(dān)體表面均勻涂布。要求擔(dān)體比表面積大、化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性好、粒度均勻。固定液往往是高沸點有機(jī)物，蒸汽壓低、穩(wěn)定性好、能溶解被分離混合物中的各組分，使各組分有足夠的分離能力、黏度低。擔(dān)體的粒度直徑一般為柱內(nèi)徑的1/20～1/25為宜。分析柱常用60～80目，80～100目，100～120的擔(dān)體，當(dāng)需用長柱或制備色譜柱時，為了減小柱壓降，選用60～80目或40～60目的擔(dān)體。表2為幾種常用的固定液，表3為氣相色譜常用的一些擔(dān)體。
　　
　　固定液選擇的一般規(guī)律：首先根據(jù)樣品沸點范圍，選擇合適溫度、適用范圍的固定液。其次根據(jù)結(jié)構(gòu)相似和相似相溶的原則，要求固定液揮發(fā)性小、蒸汽壓低、熱穩(wěn)定性好、不易分解等特性。(1)分離非極性化合物選擇非極性固定液。(2)分離極性化合物選用極性固定液。(3)分離酸性和堿性化合物選用強(qiáng)極性固定液。(4)利用特殊作用力分離，如氫鍵、π鍵選擇性分離。例如，分析測定混合樣品中苯、甲苯、乙苯的含量，選擇OV－17固定液涂布在101白色擔(dān)體上作為液體固定相即可。
　　
　　表1氣相色譜常用的固體吸附劑
　　
　　吸附劑使用溫度(℃)分析對象使用前活化處理
　　
　　活性炭＜200惰性氣體、N2、CO2和低沸點碳?xì)浠衔镅b柱，在N2保護(hù)下加熱到140～180℃，活化2～4h
　　
　　硅膠＜400C1～C4烴類，N2O、SO2、H2S、SF6、CF2Cl2等氣體裝柱，在200℃下通載氣活化2～4h
　　
　　氧化鋁＜400C1～C4烴類異構(gòu)體粉碎過篩，600℃下烘烤4h。裝柱，高于柱溫20℃下活化
　　
　　分子篩＜400惰性氣體。H2、O2、N2、CO、CH4、NO、N2O等粉碎過篩栽50～600℃下烘烤4h
　　
　　表2一些常用的固定液
　　
　　序號固定相名稱型號最高使用溫度/℃
　　
　　1
　　
　　2
　　
　　3
　　
　　4
　　
　　5
　　
　　6
　　
　　7角鯊?fù)?BR>　　
　　二甲基聚硅氧烷
　　
　　苯基(10%)甲基聚硅氧烷
　　
　　苯基(20%)甲基聚硅氧烷
　　
　　苯基(50%)甲基聚硅氧烷
　　
　　聚乙二醇－20000
　　
　　聚丁二酸二乙二醇酯SQ
　　
　　OV－1,SE-3
　　
　　OV－3
　　
　　OV－7
　　
　　DC－710，OV－17，SP－2250
　　
　　Carbowax－2308
　　
　　DEGS150
　　
　　350
　　
　　350
　　
　　350
　　
　　375
　　
　　250
　　
　　200
　　
　　3．色譜柱的制備
　　
　　填充色譜柱的制備目前還無規(guī)范化的操作，一般應(yīng)遵守以下基本原則：
　　
　　(1)盡可能篩選粒度分布均勻的載體或固定相填料。
　　
　　(2)保證固定液在載體表面涂漬均勻。
　　
　　(3)保證固定相填料在色譜柱內(nèi)填充均勻，不允許柱管內(nèi)存在死體積。
　　
　　(4)避免載體顆粒破碎和固定液的氧化作用。
　　
　　色譜柱的制備包括三個步驟：即固定液的涂漬、色譜柱填充和色譜柱老化。
　　
　　固定液的涂漬首先選用合適的溶劑。溶劑對固定液有足夠的溶解能力和適宜的揮發(fā)性。常用的溶劑有：氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、苯、甲苯等，根據(jù)樣品性質(zhì)確定固定液涂漬濃度。一般以固定液與載體重量比表示。低沸點樣品，固定液用量一般在20%～30%；高沸點樣品一般用量在1%～10%；固定液用量高，采用紅色載體；固定液用量低，采用白色載體；強(qiáng)極性、熱不穩(wěn)定的高沸點化合物如有機(jī)磷農(nóng)藥采用玻璃載體，用量<1%。涂漬方法是蒸發(fā)法和過濾法。蒸發(fā)法是將固定液溶解于略大于載體體積的溶劑中，將擔(dān)體傾入固定液溶液，讓溶劑在紅外燈照射下慢慢蒸發(fā)。過濾法是把載體與已知濃度的固定液溶液混合，然后過濾掉過量溶液，測定過濾前后的溶液體積，可計算出擔(dān)體中固定液的含量。然后讓溶劑慢慢揮發(fā)，使固定液涂漬在載體表面。
　　
　　柱子填充方式根據(jù)柱子形狀而異。一般采用抽吸、震動或敲擊柱管填充。在色譜柱一端塞上少量硅烷化玻璃棉，然后接上真空泵，另一端裝上漏斗，將填料分小批量裝入柱內(nèi)，并輕輕敲擊管壁，裝滿后在另一端塞上玻璃棉，柱兩端玻璃棉能防止柱中填料漏出。裝柱過程中應(yīng)防止填料破碎，要求填充均勻、緊密。
　　
　　色譜柱固定相必須在高于柱操作使用溫度25℃、低于固定液的最高使用溫度下老化2～24h，老化過程應(yīng)通以少量的載氣流(5～10mL·min-1)，柱出口與檢測器的入口脫開，以免污染檢測器。柱子老化的目的是除去固定相殘余溶劑和揮發(fā)性雜質(zhì)，并促進(jìn)固定液在載體表面分布均勻。在高溫和載氣流作用下也可使柱內(nèi)填料分布更趨均勻，有助于提高柱效。
　　
　　表3一些常用的氣相色譜擔(dān)體
　　
　　擔(dān)體名稱特點用途
　　
　　硅藻土類
　　
　　紅色擔(dān)體
　　
　　6201擔(dān)體
　　
　　201擔(dān)體
　　
　　202擔(dān)體
　　
　　301擔(dān)體
　　
　　孔徑較小(約0.4-1um),機(jī)械強(qiáng)度較高，比表面積較大(約4m2/g),有較多的活性吸附中心
　　
　　同上
　　
　　同上
　　
　　經(jīng)釉化處理,性能介于紅色擔(dān)體與白色擔(dān)體之間分析非極性弱極性組分
　　
　　同上
　　
　　同上
　　
　　分析中等極性組分
　　
　　硅藻土類
　　
　　白色擔(dān)體
　　
　　101擔(dān)體
　　
　　102擔(dān)體
　　
　　101/102硅烷化
　　
　　405擔(dān)體
　　
　　孔徑較大(約9um),機(jī)械強(qiáng)度較差,比表面較小(1m2/g),表面活性吸附中心較少
　　
　　同上
　　
　　氫鍵作用減弱,比表面減小,使用溫度降低
　　
　　具有白色擔(dān)體共性,吸附性低,催化活性小分析極性組分,高沸點組分
　　
　　同上
　　
　　分析水、醇、酚、胺、酸等極性化合物
　　
　　分析高沸點、極性和易分解組分
　　
　　非硅藻土類擔(dān)體
　　
　　玻璃微球
　　
　　氟擔(dān)體
　　
　　高分子多孔微球熱穩(wěn)定性好,形狀規(guī)則,大小均一,機(jī)械強(qiáng)度高,比表面小(約0.02m2/g),固定液涂量低
　　
　　耐腐蝕,熱穩(wěn)定性好,形狀規(guī)則,大小均一,比表面大的達(dá)12m2/g,小的僅0.2m2/g
　　
　　比表面積大，耐腐蝕，熱穩(wěn)定性好分析高沸點,易分解組分
　　
　　分析強(qiáng)極性組分,腐蝕性氣體以及具有化學(xué)活性的組分
　　
　　分析強(qiáng)極性物質(zhì)
　　
　　4．柱溫
　　
　　選擇柱溫的一般原則是：在使最難分離組分有盡可能好的分離前提下，柱溫的選擇以低柱溫、保留時間適宜、峰形不拖尾為準(zhǔn)。提高柱溫可使氣相、液相傳質(zhì)速率加快，有利于降低理論塔板高度，改善柱效。但增加柱溫又使縱向擴(kuò)散加劇從而加大了理論塔板高度，導(dǎo)致柱效下降。另一方面，為了改善分離效果，提高選擇性，希望柱溫較低，這又使分析時間加長。因此，選擇柱溫要兼顧這幾方面的因素。一般多采用較低的柱溫，同時減少固定液的含量和適當(dāng)增加流速。柱溫必須在固定液的最高使用溫度之下，且組分在柱內(nèi)不會冷凝、也不會分解。一般柱溫選在試樣各組分的平均沸點左右或比平均沸點略低一些(＜50℃＝。柱溫過高不利于分離。表4為分離各類組分的參考柱溫和固定液配比。
　　
　　對于寬沸程的多組分混合物，如果柱子恒定在一個溫度上，則會出現(xiàn)低沸點組分出峰擁擠以至不易辨認(rèn)，高沸點組分拖延時間很長甚至停在柱中不能出峰的缺陷。為此，可采用程序升溫法。程序升溫的條件要反復(fù)實驗加以選擇。程序升溫可以改善分離，縮短時間，得到的峰形也好。
　　
　　表4柱溫和固定液含量參考表
　　
　　混合物沸點/℃固定液參考含量/%參考柱溫/℃
　　
　　300～400
　　
　　200～300
　　
　　100～200
　　
　　氣體＜3
　　
　　5～10
　　
　　10～15
　　
　　15～25200～250
　　
　　150～200
　　
　　80～150
　　
　?。?0
　　
　　(二)檢測器
　　
　　1．檢測器種類
　　
　　氣相色譜中使用的檢測器有濃度型檢測器(熱導(dǎo)檢測器和電子俘獲檢測器)和質(zhì)量型檢測器(氫火焰離子化檢測器和火焰光度檢測器)兩種。
　　
　　熱導(dǎo)檢測器(TCD)具有結(jié)構(gòu)簡單、性能穩(wěn)定、線性范圍寬、靈敏度適中、不破壞樣品、應(yīng)用廣泛等特點，是一種通用型檢測器。
　　
　　氫火焰離子化檢測器(FID)具有結(jié)構(gòu)簡單、死體積小、靈敏度高、線性范圍寬、選擇性好等優(yōu)點，缺點是對載氣要求高、檢測時要破壞樣品、不能檢測永久性氣體如H2、N2、CS2、CO2、NO2、H2O、H2S、SiF4、HCOOH等。
　　
　　電子俘獲檢測器(ECD)具有靈敏度高、選擇性好、對電負(fù)性物質(zhì)特別敏感等特點；在環(huán)境監(jiān)測、農(nóng)藥分析等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。
　　
　　火焰光度檢測器(FPD)是一種選擇性和靈敏度較高的檢測器，主要應(yīng)用于含磷、含硫化合物的分析，也可檢測某些金屬(如Mo、W、Ti、As、Zr、Cr等)的螯合物及一般的有機(jī)物。實驗中一般選擇熱導(dǎo)檢測器和氫火焰離子化檢測器。
　　
　　2．檢測器的溫度
　　
　　TCD的靈敏度與熱絲和池體間的溫差成正比。提高橋流以提高熱絲溫度或降低池體溫度均可提高靈敏度，這取決于被分析樣品的沸點。但檢測器池體溫度不能低于被分析樣品的沸點。
　　
　　在FID中，由于氫燃燒，產(chǎn)生大量水蒸氣，若檢測器溫度低于80℃，水蒸氣不能以蒸汽狀態(tài)從檢測器中排出，冷凝成水，使靈敏度下降，噪聲增加。所以，要求FID檢測器溫度務(wù)必在120℃以上(如惠普公司的儀器要求150℃)，以確保正常響應(yīng)。一般測器溫度比柱溫高30～50℃(但要高于100℃)。
　　
　　3．電極電壓
　　
　　在FID的收集極和極化極之間，加一極化電壓，即可形成一電場，使火焰中形成正負(fù)離子能彼此分開而被有效收集。實驗表明：圓筒形和喇叭形收集極的收集效率最佳，約50V就可完全收集。FID的極化電壓一般為150～350V，點火一般用鎳鉻絲做點火線圈，接3～5V交流電源，點火時通電后線圈發(fā)紅即可。電極電壓較低時(＜50V)，電壓增加，離子信號加大，電壓過高(＞250V)，噪聲加大。
　　
　　4．TCD的靈敏度
　　
　　當(dāng)樣品組分隨著載氣從色譜柱流出并進(jìn)入檢測器后，使檢測器測量臂的氣體組成發(fā)生變化，因而氣體的熱導(dǎo)率、熱絲的溫度和電阻值也隨之發(fā)生變化，其結(jié)果是使熱導(dǎo)檢測器橋路產(chǎn)生一個不平衡電壓信號值，被定義為熱導(dǎo)檢測器的靈敏度(簡稱S)。影響S的因素有工作電流，與響應(yīng)值的3次方成正比。工作電流大則鎢絲處于灼熱狀態(tài)不穩(wěn)定且易燒壞。
　　
　　(三)載氣
　　
　　載氣通常為氮、氦和氫氣，由高壓氣瓶供給。由高壓氣瓶出來的載氣需經(jīng)過裝有活性炭或分子篩的凈化器，以除去載氣中的水、氧等有害物質(zhì)。由于載氣流速的變化會引起保留值和檢測靈敏度的變化，因此，一般采用穩(wěn)壓閥、穩(wěn)流閥或自動流量控制裝置，以確定流量恒定。載氣氣路有單柱單氣路和雙柱雙氣路兩種。前者比較簡單，后者可以補償因固定液流失、溫度波動所造成的影響，因而基線比較穩(wěn)定。
　　
　　選擇載氣需要考慮試樣組分性質(zhì)，沸點高、分子量大的物質(zhì)選用低分子量載氣(H2、He)；沸點低、分子量小的物質(zhì)選用高分子量載氣(N2、Ar)。載氣的選擇還要與所用檢測器配合。如TCD選用H2、He等提高靈敏度，F(xiàn)ID選用N2作載氣，穩(wěn)定性高、線性范圍寬。
　　
　　載氣純度影響TCDL靈敏度。在橋流160～200Ma范圍內(nèi)，用99.999%的超純氫氣比用99%的普氫靈敏度高6%～13%。
　　
　　載氣流量以稍高于最佳流速為宜。填充柱以H2、He為載氣，線速15～20cm·s-1，以N2、Ar作載氣，線速為10～20cm·s-1。為了使柱內(nèi)線速均勻，柱內(nèi)載氣壓力不易過大，要求控制在p入/p出＜3。這時柱內(nèi)線速比較均勻，有利于將低板高。壓力降過大則會引起湍流，柱效下降，在高溫條件下儀器穩(wěn)定性也降低。
　　
　　載氣流速的選擇要考慮兩種情況；當(dāng)響應(yīng)值用峰高表示時，其峰高與流速成正比；當(dāng)響應(yīng)值用峰面積表示時，峰面積與流速無關(guān)。在FID中，一般N2∶H2＝1∶1或1.5∶1，氫氣∶空氣＝1∶10或1∶15。
　　
　　TCD靈敏度受外界影響的數(shù)據(jù)表明：單臂TCD載氣流速每改變1mL·min-1，靈敏度變化25mV，雙臂則改變7mV。
　　
　　(四)樣品
　　
　　1．樣品制備
　　
　　氣相色譜分析的對象是在汽化室溫度下能成為氣態(tài)的物質(zhì)。除了少數(shù)情況以外，大多數(shù)物質(zhì)都需要進(jìn)行預(yù)處理以適應(yīng)氣相色譜分析的需求。有些精油以及諸如濃度較大的化學(xué)反應(yīng)物或低沸點石油餾分試樣，可以原樣注射進(jìn)色譜柱。即使在這種情況下也存在預(yù)分離或分餾處理的問題，以便將某些痕量組分提高到可檢測的水平。水或空氣中有機(jī)污染物的分析更需要對樣品進(jìn)行濃縮處理。而對生物樣品，這種處理就更必不可少了。如果樣品中含有大量的水、乙醇或被強(qiáng)吸附的物質(zhì)，這些物質(zhì)進(jìn)到柱內(nèi)可能導(dǎo)致某些色譜柱損壞。一些非揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)入色譜柱，除了導(dǎo)致柱損壞外，它們本身還會逐漸降解，生成揮發(fā)性物質(zhì)，造成嚴(yán)重的噪音。這些物質(zhì)都需要事先除去，或者將分析組分分離出來。樣品的預(yù)處理主要有兩類：一類是把要研究的物質(zhì)從干擾物質(zhì)中提取出來；另一類是把濃度低的樣品濃縮富集。當(dāng)然，有時在去掉干擾物質(zhì)的同時，待測組分也就得到了濃縮。常用的分離富集方法有蒸餾、萃取、吸附和冷凍富集等。有時也把這幾種方法聯(lián)合使用。
　　
　　還有一些物質(zhì)，如有機(jī)酸，極性很強(qiáng)，揮發(fā)性低，熱穩(wěn)定性差，必須進(jìn)行化學(xué)處理才能進(jìn)行色譜分析。特別是一些碳數(shù)較高的有機(jī)酸，一般需甲酯化后進(jìn)行色譜分析。甲酯化的方法很多，可以在濃硫酸或三氟化硼催化下，通過和甲醇的反應(yīng)實現(xiàn)甲酯化，也可以利用有機(jī)酸和重氮甲烷反應(yīng)實現(xiàn)甲酯化。
　　
　　2．進(jìn)樣
　　
　　進(jìn)樣系統(tǒng)包括進(jìn)樣裝置和汽化室。氣體樣品可以用注射器進(jìn)樣，也可以用定量閥進(jìn)樣。液體樣品用微量注射器進(jìn)樣。固體樣品則要溶解后用微量注射器進(jìn)樣。樣品進(jìn)入汽化室后在一瞬間就被汽化，然后隨載氣進(jìn)入色譜柱。根據(jù)分析樣品的不同，汽化室溫度可以在50～400℃范圍內(nèi)任意設(shè)定。通常，汽化室的溫度要比使用的最高柱溫高10～50℃，以保證樣品全部汽化。進(jìn)樣量和進(jìn)樣速度會影響色譜柱效率。進(jìn)樣量過大造成色譜柱超負(fù)荷，進(jìn)樣速度慢造成色譜峰加寬，影響分離效果。
　　
　　3．進(jìn)樣量和進(jìn)樣時間
　　
　　色譜柱有效分離樣品量隨色譜柱內(nèi)徑大小、固定液用量不同而不同。柱內(nèi)徑大，固定液用量高，可適當(dāng)增加進(jìn)樣量。進(jìn)樣量不宜過大，應(yīng)控制在峰高或峰面積與進(jìn)樣量呈線性關(guān)系的范圍內(nèi)。若進(jìn)樣量過大會引起色譜柱超負(fù)荷、柱效下降、峰形擴(kuò)張、保留時間改變甚至出現(xiàn)重疊峰、平頂峰等畸形峰。若進(jìn)樣量太小，擇優(yōu)的組分不能出峰。一般來說，對于填充柱氣體進(jìn)樣量0.1～10mL，液體進(jìn)樣量0.1～5mL。對于微量組分分析，為降低最低檢出濃度，有時需適當(dāng)增加進(jìn)樣量。在實際分析中，最大允許進(jìn)樣量應(yīng)控制在使半峰寬基本不變、而峰高與進(jìn)樣量呈線性關(guān)系。一般色譜柱越粗、越長、固定液含量越高，容許進(jìn)樣量就越大。
　　
　　進(jìn)樣速度要快，須在1秒內(nèi)完成，形成濃度集中的樣品“塞子”。進(jìn)樣時間短則樣品在載氣中擴(kuò)散時間短，有利于分離。如果進(jìn)樣慢，試樣的起始寬度增加，峰展寬，影響分離效果甚至不出峰。
　　
　　4．汽化室溫度
　　
　　液體樣品進(jìn)入汽化室后要求能被瞬時氣化又不被分解。進(jìn)樣量大要求汽化室溫度高些，進(jìn)樣量小可低些。一般汽化室溫度比柱溫高30～100℃。在保證樣品不被分解的前提下，高一些更好。否則出先峰前沿平坦后沿陡峭的伸舌峰，峰展寬，不利于分析。
　　
　　(五)高效液相色譜儀
　　
　　高效液相色譜法是一種分離與分析技術(shù)，是以液體作為流動相的一種色譜過程。根據(jù)溶質(zhì)在兩相中分配機(jī)理的不同，可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、離子色譜、排阻色譜等。
　　
　　高效液相色譜儀主要由高壓輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器以及數(shù)據(jù)記錄系統(tǒng)組成，如圖1所示。
　　
　　圖1高效液相色譜儀示意圖
　　
　　1．溶劑；2．混合室；3．泵；4．進(jìn)樣閥；5．微量注射器；
　　
　　6．預(yù)柱；7．分離柱；8．檢測器；9．記錄系統(tǒng)；10．廢液
　　
　　貯液器用于存放溶劑，溶劑必須很純。貯液器材料要耐腐蝕，對溶劑呈惰性，通常采用1～2L的大容量玻璃瓶，也可用不銹鋼制成。貯液器應(yīng)配有溶劑過濾器，以防止流動相中的顆粒進(jìn)入泵內(nèi)。溶劑過濾器一般用耐腐蝕的鎳合金制成，孔隙大小一般為2μm。
　　
　　1．高壓輸液泵
　　
　　高壓輸液泵是高效液相色譜儀中最關(guān)鍵的設(shè)備，除要求泵提供高壓之外，還要求輸出流量精確度高。
　　
　　高壓輸液泵一般分為恒壓泵和恒流泵兩類。恒壓泵主要指氣動放大泵，在系統(tǒng)中，泵的壓力始終保持恒定，但流速隨著系統(tǒng)壓力的變化而變化，即不能保證在任何時刻的流速都保持不變。恒流泵有往復(fù)泵和螺旋柱塞泵，這類泵輸出流量恒定。在液相色譜中應(yīng)用最多的是往復(fù)泵。泵的柱塞在輸液過程中前后往復(fù)運動。柱塞向后移動時，把溶劑吸入泵的腔體中；柱塞向前移動時，把液體排出腔體。柱塞的前后移動，是由一個偏心輪的旋轉(zhuǎn)驅(qū)動的。液體的流向是由泵的一對單向閥控制。
　　
　　如果溶劑組成隨洗脫時間按一定規(guī)律變化，則稱這種洗脫過程為梯度洗脫或溶劑程序。往復(fù)泵可以連續(xù)不斷地以恒定的流量輸送液體，更換溶劑方便，適合梯度洗脫。
　　
　　梯度洗脫是根據(jù)組分的復(fù)雜程度，在組分的洗脫過程中，不斷調(diào)整混合溶劑的組成，改變?nèi)軇┑膹?qiáng)度或溶劑的選擇性，使多組分復(fù)雜混合物得到分離。實現(xiàn)梯度洗脫主要依賴于泵系統(tǒng)，根據(jù)溶劑混合時所處的壓力，一般分為兩種類型，即低壓梯度和高壓梯度。
　　
　　(1)低壓梯度。低壓梯度是溶劑在常壓下混合，然后用高壓泵將其送至柱系統(tǒng)中。這種方法簡單，只需一個泵，經(jīng)濟(jì)實用。
　　
　　實現(xiàn)低壓梯度的最好方法是使用時間比例電磁閥，通過微處理機(jī)控制溶劑輸入電磁閥的開關(guān)頻率，以控制泵輸出的溶劑組成。
　　
　　(2)高壓梯度。高壓梯度一般使用兩臺高壓輸液泵，每臺泵輸送一種溶劑。兩臺泵輸出的溶劑在一混合室內(nèi)混合，每臺泵的溶劑流量單獨控制。
　　
　　2．進(jìn)樣裝置
　　
　　在液相色譜中，進(jìn)樣方式有微量注射器進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動進(jìn)樣器進(jìn)祥等。
　　
　　多通路進(jìn)樣閥廣泛應(yīng)用于液相色譜儀中，與氣相色譜六通閥原理相似，分為采樣和進(jìn)樣兩種位置。液相色譜中系統(tǒng)處在高壓下，因此要求多通路進(jìn)樣閥要耐高壓、耐腐蝕、耐磨、死體積小等。它們可以承受很高的壓力，不需要停流進(jìn)樣。
　　
　　3．色譜柱
　　
　　色譜柱包括柱管與固定相兩部分，是液相色譜的心臟部件。柱管材料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內(nèi)襯光滑的聚合材料的其它金屬等，金屬管用的最多。一般色譜柱長5～30cm，內(nèi)徑為4～5mm，凝膠色譜柱內(nèi)徑3～12mm。柱子裝填得好壞對柱效影響很大。對于細(xì)粒度的填料(＜20μm)一般采用勻漿填充法裝柱，先將填料調(diào)成勻漿，然后在高壓泵作用下快速將其壓入裝有洗脫液的色譜柱內(nèi)，經(jīng)沖洗后，備用。
　　
　　4．檢測器
　　
　　液相色譜檢測器可分為兩類：一類是測量樣品和流動相的共有性質(zhì)，采用差分法測量總體特性的微小差別，如示差折光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器；另一類是測量樣品中溶質(zhì)所特有的性質(zhì)，如特定波長下的紫外吸收或熒光檢測器。
　　
　　(1)紫外吸收檢測器。這種檢測器在液相色譜中應(yīng)用最廣，幾乎是一切色譜儀的必備檢測器，它噪聲低、靈敏度高、結(jié)構(gòu)簡單。
　　
　　紫外吸收檢測器的工作原理是根據(jù)比爾(Beer)定律。當(dāng)一束紫外光通過樣品池時，入射光的一部分被樣品組分吸收，吸光度與組分濃度及光程長度有如下關(guān)系
　　
　　式中I0為入射光強(qiáng)度；I為透射光強(qiáng)度；ε為摩爾吸光系數(shù)；b為檢測器光程長度；c為組分的體積摩爾濃度；A為組分吸光度；T為組分透光率。
　　
　　(2)示差折光檢測器。示差折光檢測器又稱折光指數(shù)檢測器(RefractiveIndexDetector)，最大的特點是對所有的物質(zhì)都有響應(yīng)，因此是通用型檢測器。
　　
　　示差折光檢測器工作原理是根據(jù)不同的物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)，當(dāng)樣品組分隨流動相從柱中流出，它的折光指數(shù)與純流動相不同。示差折光檢測器是以純?nèi)軇┳鲄⒈?，連續(xù)監(jiān)測柱后洗脫物折光指數(shù)的變化，并根據(jù)變化的差值確定樣品中各組分的量。
　　
　　示差折光檢測器根據(jù)光路設(shè)計分成三種不同類型：弗列斯涅耳(Fresnel)反射型、光束偏轉(zhuǎn)型和干涉測量計型。
　　
　　(3)熒光檢測器。有兩種類型的化合物可用熒光檢測器(F1uorescenceDetector)檢測，它們自身發(fā)射熒光或者通過衍生的方法使原來不發(fā)射熒光的化合物發(fā)射熒光，很多生物活性物質(zhì)、藥物制品、環(huán)境污染物等自身能發(fā)射熒光。由于熒光檢測器具有很高的靈敏度和選擇性，因而成為液相色譜常用檢測器之一。
　　
　　(4)電化學(xué)檢測器。電化學(xué)檢測器是根據(jù)電化學(xué)分析方法而設(shè)計的，主要有兩種類型：一是根據(jù)溶液的導(dǎo)電性質(zhì)，通過測定離子溶液電導(dǎo)率的大小來測量離子濃度；另一類是根據(jù)化合物在電解池中工作電極上所發(fā)生的氧化－還原反應(yīng)，通過電位、電流和電量的測量，確定化合物在溶液中的濃度。