圖一:AquaMax4000微孔板洗板機(jī)和LifeSep磁力架可應(yīng)用于MAGPIX多重磁珠檢測系統(tǒng)
材料:
- MAGPIX校準(zhǔn)試劑盒(Life Technology,Cat.#MPX-CAL-K25)
- 磷酸鹽緩沖液(PBS)
- LifeSep 96F磁力架(Dexter Magnetic Technology, Cat.#2501008-1)
- 96孔全透明微孔板(Greiner)
- ®VelosTM 高內(nèi)涵系統(tǒng)(Molecular Devices)
方法:
步驟一:按1:50比例稀釋磁珠于PBS中,96孔板中每孔加入100ul磁珠混合液
步驟二:洗板前先將微孔板放入ImageXpress Velos上成像,獲得磁珠數(shù)目
步驟三:對AquaMax微孔板洗板機(jī)設(shè)置:軟件中創(chuàng)建一個新微孔板參數(shù),選擇Greiner 96孔板,高度輸入24.2mm(正常微孔板的高度+10mm LifeSep磁力架高度),使用儀器自帶的微孔板深度自動探測功能,可以精確地檢測出微孔板的深度,保存檢測數(shù)據(jù)于程序中
步驟四:使用PBS清洗在AquaMax4000洗板機(jī)上的微孔板,洗板機(jī)按下面參數(shù)進(jìn)行設(shè)置建后,會得到最佳結(jié)果(能夠有效減少清洗過程中磁珠的損失)
吸液
- 位置:邊緣
- 洗頭吸液速率:中速
- 洗頭下降速度:3
- 高度:5mm
分裝
- 體積:150ul
- 洗頭分液速率:5
- 從第一步開始重復(fù)2遍
- 吸液(如上所設(shè)置)
使用ImageXpress Velos高內(nèi)涵系統(tǒng)所帶532nm波長的激光光源掃描綠色熒光信號,軟件分析后,可以得到微孔板清洗前后每孔中磁珠數(shù)目。
清洗前96孔板中每孔磁珠數(shù)目
每孔中的磁珠平均數(shù)=615
清洗后96孔板中每孔磁珠數(shù)目
每孔中的磁珠平均數(shù)=585
保留率=95.1%
圖二:微孔板中選取一個孔成像,對比清洗前后的結(jié)果
清洗前 清洗后
選取D5孔 選取D5孔
磁珠數(shù)目:633 磁珠數(shù)目:605
結(jié)論:
清洗過程中能夠有效降低磁珠的損失率是保證MAGPIX試驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素,當(dāng)AquaMax微孔板洗板機(jī)清洗96孔板中的MAGPIX磁珠時,使用LifeSep磁力架,按照上面所述進(jìn)行儀器設(shè)置后,超過95%的磁珠保留在微孔板中。AquaMax微孔板洗板機(jī)所具有高度自動調(diào)節(jié)和洗頭可換的功能,確保了其能夠靈活的適應(yīng)各種試驗(yàn)的要求。