液相色譜儀對食品成分分析的應(yīng)用范圍

　　1、營養(yǎng)成分分析

　　有機酸、碳水化合物、維生素、游離脂肪酸、氨基酸

　　2、食品添加劑和農(nóng)藥殘留分析

　　(1)防腐劑與甜味劑

　　可分離和測定濃縮果汁、軟飲料、果醬、蠔油和人造黃油中的山梨酸和苯甲酸防腐劑，也可同時分析可樂飲料中的阿斯巴甜和糖精。

　　(2)合成色素

　　(3)農(nóng)藥和抗生素殘留

　　高效液相色譜可對飲用水、牛奶、啤酒、谷物、馬鈴薯和豬肉等食品中的農(nóng)藥殘留和抗生素殘留的測定。

　　(4)食品毒素

　　高效液相色譜用于測定大豆、魚及貝類的多胺、次黃嘌呤、黃曲霉毒素、麻痹性貝毒素(saxitoxin)等食品毒素。

　　高效液相色譜原理：高效液相色譜是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥注入供試品，由流動相帶入柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后，依次進(jìn)入檢測器，色譜信號由記錄儀或積分儀記錄。

　　1.對儀器的一般要求

　　所用的儀器為高效液相色譜儀。色譜柱的填料和流動相的組分應(yīng)按各品種項下的規(guī)定.常用的色譜柱填料有硅膠和化學(xué)鍵合硅膠。后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用,辛基鍵合硅膠次之,氰基或氨基鍵合硅膠也有使用;離子交換填料,用于離子交換色譜;凝膠或玻璃微球等，用于分子排阻色譜等。注樣量一般為數(shù)微升。除另有規(guī)定外，柱溫為室溫，檢測器為紫外吸收檢測器。在用紫外吸收檢測器時,所用流動相應(yīng)符合紫外分光光度法。

　　正文中各品種項下規(guī)定的條件除固定相種類、流動相組分、檢測器類型不得任意改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組分的比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變,以適應(yīng)具體品種并達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗的要求。

　　2.系統(tǒng)適用性試驗

　　按各品種項下要求對儀器進(jìn)行適用性試驗，即用規(guī)定的對照品對儀器進(jìn)行試驗和調(diào)整,應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求;或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度和拖尾因子.

　　(1)色譜柱的理論板數(shù)(n)在選定的條件下，注入供試品溶液或各品種項下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時間t<[R]>(以分鐘或長度計，下同，但應(yīng)取相同單位)和半高峰寬(W<[h/2]>),按n=5.54(t<[R]>/W<[h/2]>)<2>計算色譜柱的理論板數(shù)，如果測得理論板數(shù)低于各品種項下規(guī)定的最小理論板數(shù)，應(yīng)改變色譜柱的某些條件(如柱長、載體性能、色譜柱充填的優(yōu)劣等)，使理論板數(shù)達(dá)到要求。

　　(2)分離度定量分析時，為便于準(zhǔn)確測量，要求定量峰與其他峰或內(nèi)標(biāo)峰之間有較好的分離度。分離度(R)的計算公式為：2(t<[R2]>-t<[R1]>)R=──W<[1]>+W<[2]>式中t<[R2]>為相鄰兩峰中后一峰的保留時間;t<[R1]>為相鄰兩峰中前一峰的保留時間;W<[1]>及W<[2]>為此相鄰兩峰的峰寬。除另外有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5。

　　(3)拖尾因子為保證測量精度，特別當(dāng)采用峰高法測量時，應(yīng)檢查待測峰的拖尾因子(T)是否符合各品種項下的規(guī)定,或不同濃度進(jìn)樣的校正因子誤差是否符合要求。拖尾因子計算公式為：W<[0.05h]>T=──────2d<[1]>式中W<[0.05h]>為0.05峰高處的峰寬;d<[1]>為峰極大至峰前沿之間的距離。除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.95～1.05間。也可按各品種校正因子測定項下，配制相當(dāng)于80%、100%和120%的對照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成三種不同濃度的溶液，分別注樣3次,計算平均校正因子，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。

　　3.測定法

　　定量測定時，可根據(jù)樣品的具體情況采用峰面積法或峰高法。但用歸一法或內(nèi)標(biāo)法測定雜質(zhì)總量時，須采用峰面積法。

　　(1)面積歸一化法測定供試品(或經(jīng)衍生化處理的供試品)中各雜質(zhì)及雜質(zhì)的總量限度采用不加校正因子的峰面積歸一法。計算各雜質(zhì)峰面積及其總和，并求出占總峰面積的百分率。但溶劑峰不計算在內(nèi)。色譜圖的記錄時間應(yīng)根據(jù)各品種所含雜質(zhì)的保留時間決定，除另有規(guī)定外,可為該品種項下主成分保留時間的倍數(shù)。

　　(2)主成分自身對照法當(dāng)雜質(zhì)峰面積與成分峰面積相差懸殊時，采用主成分自身對照法。在測定前，先按各品種項下規(guī)定的雜質(zhì)限度，將供試品稀釋成一定濃度的溶液作為對照溶液，進(jìn)樣，調(diào)節(jié)檢測器的靈敏度或進(jìn)樣量，使對照溶液中的主成分色譜峰面積滿足準(zhǔn)確測量要求。然后取供試品溶液，進(jìn)樣，記錄時間，除另有規(guī)定外，應(yīng)為主成分保留時間的倍數(shù)。根據(jù)測得的供試品溶液的各雜質(zhì)峰面積及其總和并和對照溶液主成分的峰面積比較，計算雜質(zhì)限度。

　　(3)內(nèi)標(biāo)法測定供試品中雜質(zhì)的總量限度采用不加校正因子的峰面積法。取供試品,按各品種項下規(guī)定的方法配制不含內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液,注入儀器,再配制含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，在同樣的條件下注樣。記錄的時間除另有規(guī)定外，應(yīng)為該品種項下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)峰保留時間的倍數(shù)，色譜圖上內(nèi)標(biāo)峰高應(yīng)為記錄儀滿標(biāo)度的30%以上，否則應(yīng)調(diào)整注樣量或檢測器靈敏度。

　　系統(tǒng)控制器ProminenceCBM-20A/20Alite

　　CBM-20A

　　可連接的單元：輸液單元最多4臺、自動進(jìn)樣器1臺、柱溫箱1臺、檢測器最多2臺、鎦分收集器1臺、輔助控制器最多2臺

　　連接單元數(shù)：8(可增至12)

　　數(shù)據(jù)緩沖：約24小時之1分析(采樣率500ms時，只限LCsolution使用時)

　　CBM-20Alite

　　可連接的單元：輸液單元最多4臺、自動進(jìn)樣器(SIL-10AF/10AP/10A除外)1臺、柱溫箱1臺、檢測器最多2臺、輔助控制器最多2臺

　　連接單元數(shù)：5

　　數(shù)據(jù)緩沖：約24小時之1分析(采樣率500ms時，只限LCsolution使用時)

　　輸液單元ProminenceLC-20AD/20AT/20AB

　　LC-20AD

　　輸液方式：并聯(lián)雙柱塞

　　柱塞容量：10μL

　　最大排液壓力：40MPa

　　流量設(shè)定范圍：0.0001mL/min-10.0000mL/min

　　流量準(zhǔn)確度：1%或0.5μL/min其中較大值以內(nèi)

　　流量精密度：0.1%RSD以下

　　LC-20AT

　　輸液方式：串聯(lián)雙柱塞

　　柱塞容量：主泵頭47μL、副泵頭23μL

　　最大排液壓力：40MPa

　　流量設(shè)定范圍：0.001mL/min-10.000mL/min

　　流量準(zhǔn)確度：2%或2μL/min其中較大值以內(nèi)

　　流量精密度：0.1%RSD以下

　　LC-20AB

　　輸液方式：并聯(lián)雙柱塞(2式)

　　柱塞容量：10μL

　　最大排液壓力：40MPa

　　流量設(shè)定范圍：0.0001mL/min-10.0000mL/min

　　流量準(zhǔn)確度：1%或0.5μL/min其中較大值以內(nèi)

　　流量精密度：0.1%RSD以下

　　梯度系統(tǒng)

　　LC-20AB

　　梯度方式：高壓混合

　　混合溶劑數(shù)：2液

　　LC-20AD/20AT高壓GE規(guī)格

　　梯度方式：高壓混合

　　混合溶劑數(shù)：2液或3液

　　LC-20AD/20AT低壓GE規(guī)格

　　梯度方式：低壓混合

　　混合溶劑數(shù)：最多4液

　　紫外可見檢測器

　　ProminenceSPD-20A/20AVUV-VIS檢測器

　　ProminenceSPD-M20APDA檢測器

　　SPD-20A/SPD-20AV

　　光源：SPD-20AD2燈、SPD-20AVD2燈、W燈

　　波長范圍：SPD-20A190nm-700nm、SPD-20AV190nm-900nm

　　波長準(zhǔn)確度：1nm以下

　　波長精密度：0.1nm以下

　　噪聲：±0.25×10-5AU

　　漂移：1×10-4AU/h

　　線性：>2.5AU

　　功能：190nm-370nm或371nm以上雙波長檢測，比例色譜圖輸出，波長掃描，時間程序

　　SPD-M20A

　　光源：D2燈、W燈

　　二極管元件數(shù)：512

　　波長范圍：190nm-800nm

　　波長準(zhǔn)確度：1nm以下

　　波長精密度：0.1nm以下

　　噪聲：±0.3×10-5AU

　　漂移：0.5×10-3AU/h

　　線性：>2.0AU

　　功能：等高線輸出，光譜檢索，最大輸出

　　自動進(jìn)樣器ProminenceSIL-20A/20AC

　　進(jìn)樣方式：全量進(jìn)樣，進(jìn)樣量可變式

　　進(jìn)樣量設(shè)定范圍：0.1μL-100μL(標(biāo)準(zhǔn))，1μL-2,000μL(選購件)

　　試樣處理數(shù)：

　　175(1mL試樣瓶)

　　105(1.5mL試樣瓶)SIL-20AC70(1.5mL試樣瓶)

　　50(4mL試樣瓶)

　　192(96-孔MTP2塊)

　　768(384-孔MTP2塊)

　　在上述各規(guī)格外另可使用1.5mL試樣瓶10個

　　進(jìn)樣量準(zhǔn)確度：1%以下

　　進(jìn)樣量精密度：0.3%RSD以下

　　交叉污染：0.005%以下(萘、洗必泰)

　　反復(fù)進(jìn)樣次數(shù)：最大30/1試樣

　　針清洗：在進(jìn)樣前后任意設(shè)定

　　試樣冷卻器：SIL-20A無SIL-20AC模塊冷卻加熱方式，兼除潮功能4℃-40℃

　　試樣架切換器

　　試樣架切換器A

　　適用板：96-孔MTP，96-孔DWP

　　板處理塊數(shù)：12P

　　試樣冷卻器：無

　　試樣架切換器C

　　適用板：96-孔MTP，96-孔DWP

　　板處理塊數(shù)：12P

　　試樣冷卻器：模塊冷卻加熱方式，兼除潮功能4℃-40℃

　　柱溫箱ProminenceCTO-20A/20AC

　　調(diào)溫方式：強制空氣循環(huán)式

　　冷卻方式：CTO-20A無、CTO-20AC電子冷卻式

　　溫度控制精密度：0.1℃以下

　　溫度控制范圍：CTO-20A(室溫 10)℃-85℃、CTO-20AC(室溫-10)℃-85℃

　　收容空間：W220×H365×D95mm

　　可收容儀器：手動進(jìn)樣器2個，梯度混合器，高壓流路切換閥2個等

　　定時程序：線性溫度程序

　　安全措施：溶劑傳感器、溫度保險絲、上限溫度限制

　　高效液相色譜(LC-20A)分析結(jié)果重復(fù)性好，靈敏度高，定性定量準(zhǔn)確，并且前處理工作強度較低，可在各級食品檢測單位中推廣應(yīng)用。