目前，在國內(nèi)通用的確診禽類中禽流感病毒H7N9亞型的檢測技術(shù)中，除采用傳統(tǒng)的雞胚病毒分離方法外，通常采用核酸檢測方法，如普通PCR方法和基于熒光RT-PCR的“二步法”，但還沒有建立起采用熒光RT-PCR技術(shù)“一步法”檢測禽流感病毒H7N9亞型的方法。
據(jù)該項(xiàng)目組負(fù)責(zé)人、北京局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室博士高志強(qiáng)介紹，項(xiàng)目在實(shí)驗(yàn)過程中，共建立了3種檢測方法。最終的禽流感病毒H7N9亞型雙重?zé)晒釸T-PCR檢測方法是在禽流感病毒H7亞型和N9亞型單重?zé)晒釸T-PCR檢測方法的基礎(chǔ)上通過優(yōu)化建立，從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)禽流感病毒H7N9亞型的一步快速定型。這種方法不僅能檢測最近流行的H7N9毒株，還可以用于篩查其他H7亞型毒株。此方法不僅引物特異，而且探針特異，這一“雙特異”性保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時(shí)比普通PCR檢測技術(shù)要靈敏100~1000倍。
高志強(qiáng)還指出，本項(xiàng)目在實(shí)施過程中，制備了H7N9病毒的HA和NA基因全長的外標(biāo)物質(zhì)，具有均勻和穩(wěn)定的特點(diǎn)，可在檢測過程中對(duì)逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增這兩個(gè)重要環(huán)節(jié)進(jìn)行控制，對(duì)規(guī)范診斷檢測試劑和實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制具有重要意義，使不同試劑的檢測結(jié)果具有了可比性，可用于消除不同人員操作間的差異，解決了目前H7N9檢測缺乏質(zhì)量控制外標(biāo)物質(zhì)的現(xiàn)狀。
鑒定會(huì)上，由來自中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院、中國科學(xué)院、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院等單位的7名專家組成的鑒定委員會(huì)審查了項(xiàng)目組提交的相關(guān)資料，聽取了項(xiàng)目組的匯報(bào)，審閱了相關(guān)鑒定資料，最終同意項(xiàng)目成果通過鑒定。
北京局自2001年開始開展熒光RT-PCR檢測技術(shù)研究，是國內(nèi)首家將熒光PCR技術(shù)應(yīng)用到檢驗(yàn)檢疫領(lǐng)域和動(dòng)物疫病防控領(lǐng)域的單位，并在實(shí)踐中不斷發(fā)展完善熒光RT-PCR檢測技術(shù)，先后建立了禽流感病毒、新城疫病毒、口蹄疫病毒等多項(xiàng)熒光RT-PCR檢測技術(shù)，獲得國內(nèi)首個(gè)動(dòng)物疫病熒光PCR檢測新藥證書。
據(jù)悉，自3月31日國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)通報(bào)上海和安徽發(fā)現(xiàn)3例人感染H7N9禽流感病例后，在國家質(zhì)檢總局有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)的指導(dǎo)下，該局第一時(shí)間成立了禽流感檢測技術(shù)研究應(yīng)急專項(xiàng)小組。北京局局長齊京安號(hào)召：“疫情就是命令，我們要迅速行動(dòng)、全力以赴，為保障人民群眾身體健康作出檢驗(yàn)檢疫部門的貢獻(xiàn)。”一聲令下，科技人員紛紛行動(dòng)起來：及時(shí)收集、查閱最新流感資料;第一時(shí)間獲得此次H7N9亞型禽流感病毒的安徽株和上海株的基因序列;結(jié)合實(shí)驗(yàn)室多年整理保存的禽流感研究資料，重點(diǎn)針對(duì)HA基因和NA基因進(jìn)行序列分析比對(duì)……經(jīng)過一系列努力，最終找到了變異位點(diǎn)，確定了雙重?zé)晒釸T-PCR檢測技術(shù)研究方案。
北京局副局長李忠榜表示，該項(xiàng)目為禽流感病毒H7N9亞型的檢測提供了快速、高效方法，能夠檢測到樣品中微量禽流感病毒。該課題鑒定后，課題組還將做大量的驗(yàn)證工作，在實(shí)踐的檢驗(yàn)過程中不斷完善并制定禽流感病毒H7N9亞型檢測國家標(biāo)準(zhǔn)，以便將該技術(shù)盡早應(yīng)用到防控工作中，為確?；钋莺颓莓a(chǎn)品的進(jìn)出口安全，為國內(nèi)養(yǎng)殖企業(yè)禽流感疫情普查，為老百姓吃上放心禽產(chǎn)品提供服務(wù)。同時(shí)，該局會(huì)盡快將研究成果應(yīng)用到檢驗(yàn)檢疫工作中，接受實(shí)踐檢驗(yàn)，為提高口岸一線的檢測能力做好技術(shù)儲(chǔ)備和技術(shù)支持工作。
