用棉簽在咽部或者鼻腔蘸一下，再用儀器從中提取核酸，兩步就能完成檢測(cè)樣本的準(zhǔn)備。樣本與H7N9檢測(cè)試劑混合，放入檢測(cè)儀中，兩小時(shí)后一張基因擴(kuò)增圖就可呈現(xiàn)在電腦屏幕上，通過曲線分析，輕松得出結(jié)論——這是一次利用最新分子診斷方式，檢測(cè)H7N9病毒的全過程。
隨著H7N9禽流感病毒逐步擴(kuò)散，快速研發(fā)、生產(chǎn)H7N9檢測(cè)試劑盒成了防控病毒的第一道關(guān)口。近日，9家專門從事核酸技術(shù)診斷產(chǎn)品的單位參與了科技部等多部委緊急召集的快速研制產(chǎn)品聯(lián)席會(huì)，其中受上海市科技創(chuàng)業(yè)中心創(chuàng)新基金資助的企業(yè)有兩家——上海之江生物科技股份有限公司和上海仁度生物科技有限公司。這兩家位于張江高新區(qū)的生物科技企業(yè)從不同角度切入，為H7N9“量身定做”了一套檢測(cè)方法。
上海之江：站在防疫檢控第一線
H7N9新發(fā)病例的檢測(cè)越發(fā)快速精準(zhǔn)，這背后有一個(gè)共同的名字：上海之江。其最新研究成果——禽流感H7N9核酸測(cè)定試劑盒(熒光PCR法)成功運(yùn)用于多個(gè)省市新發(fā)病例的檢測(cè)。
該產(chǎn)品是國(guó)內(nèi)目前唯一大量供應(yīng)的成品化試劑盒，已批量供應(yīng)各級(jí)疾病預(yù)防控制中心、動(dòng)物疫病控制中心、出入境檢驗(yàn)檢疫局進(jìn)行疫情監(jiān)測(cè)，并出口泰國(guó)、德國(guó)。
與同類產(chǎn)品相比，上海之江試劑盒的優(yōu)勢(shì)是“一管雙檢”，即研究人員只需提取一次樣本，試劑盒能同時(shí)反應(yīng)H7及N9基因，免去重復(fù)檢測(cè)的麻煩;原本需要3天才能檢測(cè)出的結(jié)果，兩小時(shí)便能搞掂。
從第一例發(fā)現(xiàn)的人感染H7N9病例開始，上海之江搶先研究樣本、篩選數(shù)據(jù)，快速得出測(cè)序結(jié)果。對(duì)核心檢測(cè)材料的制作需要速度和精度，通過多次測(cè)試，上海之江最終采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)結(jié)合熒光探針技術(shù)。4月2日，第一批產(chǎn)品成功下線;4月4日，初次試用結(jié)果反饋為“效果好、分型準(zhǔn)確”;4月5日，產(chǎn)品移交中試。
實(shí)踐證明，對(duì)禽流感H7N9特異性H7和N9基因片段進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)，能夠特異性鑒別其他季節(jié)性流感病毒和常見呼吸道感染病原體，可用于臨床對(duì)可疑感染患者的病原學(xué)鑒別診斷。
2008年手足口病病原體核酸測(cè)定、2009年H1N1檢測(cè)試劑盒、如今的H7N9檢測(cè)……面對(duì)一次次重大考驗(yàn)，上海之江總能快速反應(yīng)，成功應(yīng)對(duì)，如今已完成近300項(xiàng)基因診斷快速診斷產(chǎn)品的研發(fā)，幾乎涵蓋了國(guó)內(nèi)所有法定傳染病的檢測(cè)試劑，產(chǎn)品出口70多個(gè)國(guó)家和地區(qū)。
成功源自企業(yè)不斷創(chuàng)新完善的平臺(tái)技術(shù)。在上海之江，150名員工中有近一半是研發(fā)人員，確保了在緊急情況下的“智囊儲(chǔ)配”;同時(shí)，他們建立起一套完善高效的合作機(jī)制，從實(shí)驗(yàn)室到生產(chǎn)線，每環(huán)節(jié)有序切換，確保了最短時(shí)間應(yīng)對(duì)突發(fā)狀況。
上海之江注重積累。用7年時(shí)間建立起一個(gè)流感數(shù)據(jù)庫，并不斷完善。在每次的關(guān)鍵時(shí)刻，正是這些積累，確保上海之江以最快的速度、最高的效率找到解決問題的關(guān)鍵鑰匙。上海之江負(fù)責(zé)人表示：“把H1到H16、N1到N9的數(shù)據(jù)庫全部做完，以后遇到流感病毒，我們的反應(yīng)還能更快。”
上海仁度：前沿技術(shù)“新、特、異、精”
如果說上海之江從DNA擴(kuò)增技術(shù)入手的PCR檢測(cè)方法為“偵破”H7N9提供了快速準(zhǔn)確的傳統(tǒng)路徑，那么上海仁度生物科技有限公司的SAT法——恒溫RNA(核糖核酸)擴(kuò)增實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)技術(shù)，則以RNA為靶標(biāo)快速檢測(cè)特征性的基因表達(dá)，為檢測(cè)H7N9提供了全新視角。
相較于DNA，RNA診斷技術(shù)有靈敏度高、與臨床相關(guān)性好、不易污染等優(yōu)越性，屬于體外診斷行業(yè)的最新發(fā)展趨勢(shì)，上世紀(jì)90年代在國(guó)外逐漸流行，此前在我國(guó)尚屬空白。上海仁度自主創(chuàng)新的SAT法幾乎去除了所有抑制劑，允許使用大體積樣本且可同時(shí)處理多種樣本，國(guó)際上具有類似技術(shù)的企業(yè)不足5家。
“SAT技術(shù)直接定位于流感病毒基因RNA，比起傳統(tǒng)方法，不再需要通過DNA中轉(zhuǎn)，檢測(cè)速度更快，僅需1.5小時(shí)左右。”以RNA為靶標(biāo)快速檢測(cè)特征性的基因表達(dá)，靈敏度是目前常用技術(shù)的數(shù)百、甚至上千倍，準(zhǔn)確率大幅提高。
接到研發(fā)任務(wù)后，上海仁度立即著手對(duì)H7N9病原體基因序列分析，目前小樣已經(jīng)完成，正在與上海公共衛(wèi)生中心合作臨床驗(yàn)證，爭(zhēng)取盡快向市場(chǎng)推出符合法規(guī)的診斷產(chǎn)品。
SAT技術(shù)“新、特、異、精”，此前就已列入國(guó)家儲(chǔ)備項(xiàng)目。2012年，上海仁度的高敏感性HIV核酸檢測(cè)及主要機(jī)會(huì)性感染核酸檢測(cè)試劑研究課題、結(jié)核病新型診斷產(chǎn)品研發(fā)及其產(chǎn)業(yè)化、艾滋病國(guó)產(chǎn)化診斷試劑的研發(fā)等均入選國(guó)家重大專項(xiàng)。
但上海仁度方面也表示，由于SAT技術(shù)在國(guó)內(nèi)仍屬“新鮮事物”，制作成本偏高，在推廣上也是阻力重重，產(chǎn)品真正得到廣泛應(yīng)用，仍需相關(guān)部門的合力推動(dòng)。
