摘要:差速離心是一種最常用的方法。在這種方法中,離心管在開(kāi)始時(shí)裝滿了均一的樣品溶液。通過(guò)在一定速度下一定時(shí)間的離心后,就可得到兩個(gè)部份。
制備型超高速離心機(jī)的幾種分離方法:
1.差速離心:逐次增加離心力,每次可沉降樣品溶液中的一些組份。
差速離心是一種最常用的方法。在這種方法中,離心管在開(kāi)始時(shí)裝滿了均一的樣品溶液。通過(guò)在一定速度下一定時(shí)間的離心后,就可得到兩個(gè)部份:沉淀和上清液。
通常在第一次離心時(shí)把大部分不需要的大粒子沉降去掉。這時(shí)所需的組份大部分仍留在上清液中。然后將收集到的上清液以更高速度離心,把所需的粒子沉積下來(lái)。離心的時(shí)間要選擇得當(dāng),使大部份不需要的更小的粒子仍留在上清液中。對(duì)于得到的沉淀和上清液可以進(jìn)行進(jìn)一步的離心,直到達(dá)到所需要的分離純度為止。
差速離心的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單,但分離純度不高。
2.密度梯度離心法:可以同時(shí)使樣品中幾個(gè)或全部組份分離,具有很好的分辨率。
?。?)速率區(qū)帶法(ratezonal):
根據(jù)樣品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S)。大致步驟如下:
在離心管中裝入密度梯度溶液,溶液的密度從離心管頂部至底部逐漸增加(正梯度)。
將所需分離的樣品小心地加至密度梯度溶液的頂部。樣品在梯度溶液表面形成一負(fù)梯度。
由于不同大小的粒子在離心力作用下,在梯度中移動(dòng)的速度不一樣,所以經(jīng)過(guò)離心后會(huì)形成幾條分開(kāi)的樣品區(qū)帶。
注意:樣品粒子的密度必須大于梯度液注中任一點(diǎn)的密度。離心過(guò)程必須在區(qū)帶到達(dá)管子底部前停止。
?。?)等密度離心法(isopycnic):
根據(jù)粒子的不同密度來(lái)分離。離心過(guò)程中,粒子會(huì)移至與它本身密度相同的地方形成區(qū)帶。
密度樣度的選擇要使梯度的范圍包括所有待分離粒子的密度。樣品可以在密度梯度液粒上面或均勻分布在密度梯度中。經(jīng)離心后,樣品粒子達(dá)到它們的平衡點(diǎn)。
注意:平衡后粒子的分離完全由其密度決定,與時(shí)間無(wú)關(guān),此時(shí)再改變離心轉(zhuǎn)速,只能改變區(qū)帶的相對(duì)位置。
密度梯度分析法
?。?)梯度介質(zhì)性質(zhì)與選擇:
A、應(yīng)具備的性質(zhì):
梯度物質(zhì)的選擇原則是滿足分離方法的基本要求,一個(gè)理想的密度材料標(biāo)準(zhǔn)它應(yīng)是:
所形成的溶液密度應(yīng)包括所需要的密度范圍。