準確的分析方法對于生物化學(xué)實驗是尤為重要的,在各種生物化學(xué)分析技術(shù)中,首先要熟練掌握的就是準確的移液技術(shù)。為此我們就需要用到各種形式的移液器,其中有一些是我們在化學(xué)實驗中未用過而在生化實驗中卻是常用的。下面萊貝就
來具體說說這些各式各樣的移液器。
1 滴管
滴管使用方便,可以用于半定量移液,其移液量為1mL~5mL,常用移液量程為2mL,可以更換不同大小的滴頭。滴管有長、短兩種,新出的一種帶刻度和緩沖泡的滴管,能比普通滴管更準確地移液,并且防止液體吸入滴頭。
2 移液管(吸管)
移液管(吸管)使用前應(yīng)先清洗至內(nèi)壁不掛水珠,1mL以上的吸管可用吸管專用刷刷洗,0.1mL、0.2mL 和0.5mL的吸管可用洗滌劑浸泡,必要時可以用超聲清洗器清洗。由于鉻酸洗液致癌,要盡量避免使用。若有大量成批的吸管洗后需要沖洗,可以使用沖洗桶,將吸管尖端向上置于桶內(nèi),用自來水多次沖洗后再用蒸餾水或無離子水沖洗。
吸管分為兩種,一種是無分度的,稱為大肚吸管,精確度較高,其相對誤差A(yù) 級為0.7%~0.8%,B 級為1.5%~0.16%,液體自標線流至口端(留有殘液),A 級等待15s,B 級等待3s。另一種吸管為有分度吸管,管身為一粗細均勻的玻璃管,上面均勻刻有表示容積的分度線,其準確度比大肚吸管要低,相對誤差A(yù) 級為0.8%~0.2%,B 級為1.6%~0.4%,A 級、B 級在吸管身上有A、B 字樣,有”快”字則為快流式,有”吹”字則為吹出式,無”吹”字的吸管不可以將管尖的殘留液吹出。吸、放溶液前要先用吸水紙擦拭管尖。
3 微量進樣器
微量進樣器常常被用作氣相和液相色譜儀的進樣器,在生化實驗中主要是用作電泳實驗的加樣器。
一般可以分為無存液和有存液兩種。
(1)10μL 以下的極微量液體進樣。
無存液微量進樣器:進樣器的不銹鋼芯子直接通到針尖端處,不會出現(xiàn)存液。
(2)10μL~100μL 有存液微量進樣器:不銹鋼的針尖管部分是空管,進樣器的柱塞不能到達,因而管內(nèi)會存有空氣或液體,其使用注意事項是:①不可吸取濃堿溶液,以免腐蝕玻璃和不銹鋼零件;②因為有存液,所以吸液時要來回多拉幾次,將針尖管內(nèi)的氣泡全部排盡;③針尖管內(nèi)孔極小,使用后尤其是吸取過蛋白質(zhì)溶液后,必須立即清洗針尖管,防止堵塞。若遇針尖管堵塞,不可以用火燒,只能用φ0.1mm 的不銹鋼絲耐心串通;④進樣器未潤濕時不可來回干拉芯子,以免磨損而漏氣;⑤若進樣器內(nèi)發(fā)黑,則說明有不銹鋼氧化物,可一用芯子蘸少量肥皂水,來回拉幾次就可以清除掉。
4 自動移液器
這種自動移液器在生化實驗中大量地使用(比如Eppendorf、Biohit以及IKA移液器),它們主要用于多次重復(fù)的快速定量移液,可以只用一只手操作,十分方便。移液的準確度(即容量誤差)為±(0.5%~1.5%),移液的精密度(即重復(fù)性誤差)更小些,為≤0.5%。
移液器可以分為二種:一種是固定容量的,比較常用的有100μ L等多種規(guī)格。每種移液器都有其專用的聚丙烯塑料吸頭,吸頭通常是一次性使用,當然也可以超聲清洗后重復(fù)使用,而且此種吸頭還可以進行120℃高壓滅菌;另一種是可調(diào)容量的移液器,常用的有200μL、 500μL 和1000μL 等幾種規(guī)格。
可調(diào)式移液器(Eppendorf、Biohit以及IKA移液器)的操作方法是用拇指和食指旋轉(zhuǎn)移液器上部的旋鈕,使數(shù)字窗口出現(xiàn)所需容量體積的數(shù)字,在移液器下端插上一個塑料吸頭,并旋緊以保證氣密,然后四指并攏握住取液器上部,用拇指按住柱塞桿頂端的按鈕,向下按到第一停點,將移液器的吸頭插入待取的溶液中,緩慢松開按鈕,吸上液體,并停留1~2秒鐘(粘性大的溶液可適當加長停留時間),將吸頭沿器壁滑出容器,用吸水紙擦去吸頭表面可能附著的液體,排液時吸頭接觸傾斜的器壁,先將按鈕按到第一停點,停留一秒鐘(粘性大的液體要加長停留時間),再按壓到第二停點,吹出吸頭尖部的剩余溶液,如果不便于用手取下吸頭,可按下除吸頭推桿,將吸頭推入廢物缸。
自動移液器(Eppendorf、Biohit以及IKA移液器)的使用注意事項是:
①吸取液體時一定要緩慢平穩(wěn)地松開拇指,絕不允許突然松開,以防將溶液吸入過快而沖入移液器內(nèi)腐蝕柱塞而造成漏氣。
②為獲得較高的精度,吸頭需預(yù)先吸取一次樣品溶液,然后再正式移液,因為吸取血清蛋白質(zhì)溶液或有機溶劑時,吸頭內(nèi)壁會殘留一層”液膜”,造成排液量偏小而產(chǎn)生誤差。
③濃度和粘度大的液體,會產(chǎn)生誤差,為消除其誤差的補償量,可由試驗確定,補償量可用調(diào)節(jié)旋鈕改變讀數(shù)窗的讀數(shù)來進行設(shè)定。
④可用分析天平稱量所取純水的重量并進行計算的方法,來校正移液器,1mL 蒸餾水20℃時重0.9982g。
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