反相HPLC色譜柱的推薦再生步驟
　　
　　1.取下色譜柱，然后重新連接到色譜儀上，讓液體/氣體反方向流過色譜柱。
　　
　　2.用HPLC級水沖洗掉鹽/緩沖液。以1毫升/分鐘的速度把25毫升水泵入色譜柱。

　　3.用25毫升異丙醇沖洗色譜柱。

　　4.用25毫升二氯甲烷沖洗色譜柱。

　　5.用25毫升正己烷沖洗色譜柱。

　　6.再次用25毫升二氯甲烷沖洗色譜柱。

　　7.用25毫升異丙醇沖洗色譜柱。

　　8.按正確的流動方向，把色譜柱重新連接到色譜上。用不含緩沖液的流動相沖洗色譜柱，然后重新倒入緩沖液。

　　9.用25到50毫升流動相平衡色譜柱。

　　10.注入標準物或樣品，檢查性能是否恢復。
　　
　　色譜柱的保養(yǎng)
　　
　　在正常情況下，色譜柱至少可以使用3—6個月，能完成數(shù)百次以上的分離。但是，若操作不慎，將使色譜柱很易損壞而不能使用。因此為了保持柱效、柱容量及滲透性，必須對色譜柱進行仔細地保養(yǎng)。
　　
　　1．色譜柱極易被微小的顆粒雜質培塞，使操作壓力速升高而無法使用，因此必須將流動相仔細地蒸餾或用0.45μm孔徑的濾膜過濾。在流動相組貯槽與色譜柱間，安裝0.45μm孔徑的過濾器。在柱子上端接頭處裝上多孔過濾片，以防止固體顆粒進入色譜柱中。在水溶液流動相中，細菌容易生長，可能堵塞篩板加入0.01％NoHa能防止能防止細菌生長。
　　
　　2．最好使用進祥閥進樣，以防止注射器進樣時、注射隔膜碎屑堵塞柱子入口。
　　
　　3．對硅膠基鍵合相填科，水溶液流動相的PH值不得超出2—8．5的范圍，使溫度不宜過高。柱子在酸性或堿性條件下使用之后，。應依次用水、甲醇清洗，對暫時不用而需要較長時間保存的柱子，要用純甲清洗，柱子兩端用金屬螺帽封閉，保存于干凈的有機溶劑中。
　　
　　4．要防止色譜柱被振動或撞擊，否則柱內(nèi)填料床層產(chǎn)生裂縫和空隙，會使色譜峰出現(xiàn)“駝峰”或“對峰”。
　　
　　5．要防止流動相逆向流動，否則將使固定相層位移，柱效下降。
　　
　　6．使用保護柱。連續(xù)注射含有未被洗脫樣品時，會使柱效下降，保留值改變。為了延長柱壽命，在進樣閥和分析柱間加上保護柱，其長度一般為3—5cm，填充與分析柱性質相似的表面多孔型固定相，因此可干法填裝。而且價廉、更換容易。實驗表明，使用保護柱后，除了使擴為零的組分的塔板數(shù)減少外，其柱效下降很少。
　　
　　色譜柱的再生
　　
　　一般情況下，硅膠和ODS等化學鍵合固定相再生是困難的。有時，采用下述方法可能提高校效。
　　
　　1．由于雜質微粒等因素，使柱上端固定相變色，柱效下降。這時，可仔細地將變色部分除去（約3mm左右），再補充新的固定香。
　　
　　2．當色譜柱吸附未被洗脫成分時，柱效將明顯下降，可選擇合適的溶劑進行洗凈。
　　
　　3．對離子交換樹脂柱，先經(jīng)1mol／LHCI相1molNaOH溶液洗凈，再以1—2mol/LNaCl水溶液平衡，以超聲波發(fā)生器進行清洗，通?？色@良好的效果。
　　
　　4．當采用梯度洗脫時，柱在重復使用前，用泵把幾倍于柱體積的起始溶劑壓經(jīng)柱子，以重新建立起始的平衡來得到再生。
　　　　
　　在高效液相色譜使用過程中故障排出時要遵守以下原則：一次只改變一個因素，從而確定假定因素與問題之間的聯(lián)系；如果通過更換組件來排查故障時要注意將拆下的完好組件裝回原位，從而避免浪費；養(yǎng)成良好的記錄習慣，一個良好的記錄是成功地進行故障排除的關鍵。
　　
　　總之，在使用高效液相色譜時一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養(yǎng)，儀器系統(tǒng)的干凈是用好儀器和維護維修儀器的關鍵。