核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗的基礎(chǔ)，核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的最重要因素，也是下游分子生物學(xué)試驗成敗的關(guān)鍵。目前常見的核酸純化方法有PC 抽提/醇沉淀方法、高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法、離心柱法和生物磁珠法，這幾種方法各有其優(yōu)勢和劣勢。
一、PC抽提法
PC 抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會被一次去除，必須靠多次抽提，方可徹底去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質(zhì)難以徹底去除，以及基因組 DNA 會斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC 抽提的另外一個用途是，利用酸性酚可以部分去除 DNA 的特點，在 RNA 抽提時獲得 DNA 殘留極少的 RNA。不過有一點要提醒的是，某些植物樣品，在去除某些雜質(zhì)之前，是不能使用 PC 抽提的，否則核酸必定降解。PC抽提最大的優(yōu)勢是成本低廉，對實驗條件要求較低，對于經(jīng)費緊張的實驗室較為實用。
二、高鹽沉淀法
高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法，同樣也是一個非常不錯的方法。與 PC 抽提方法相比，除了純度的穩(wěn)定性可能要低一點外，該方法幾乎克服了 PC 抽提的所有缺點。更快、更輕松的去除蛋白質(zhì)所可以用于大規(guī)模抽提，但其不足之處是純度 (蛋白質(zhì)殘留) 不夠穩(wěn)定，蛋白質(zhì)的沉淀效率在4℃會更好一些。
三、離心柱法
離心柱純化法，是目前試劑盒提取廣泛應(yīng)用的方法。其最大特點是受人為操作因素影響小，純度的穩(wěn)定性很高 (雖然純度不一定比PC 純化方法更高)。加入的液體通過離心后會進入另外一個離心管中，與含有核酸的柱子完全是分開的，所以洗滌更徹底。其致命弱點是樣品過量，提取效率較低，且需要反復(fù)離心，操作復(fù)雜，成本也較高。
四、生物磁珠法
生物磁珠法是將純化介質(zhì)包被在納米級生物磁珠表面，通過介質(zhì)對核酸的吸附，在外加磁場下使核酸附著于磁珠定向移動，從而達到固液分離純化的作用。與其他幾種方法相比，生物磁珠法具有很多無法比擬的優(yōu)勢，如：
①提取靈敏度高（微量材料即可提?。?/DIV>
②純化純度高（完全與蛋白鹽等雜質(zhì)分離）
③提取產(chǎn)量高（每mg磁珠能吸附500ug DNA）
④分離快速（磁分離只需幾秒）
⑤自動化操作（加液后完全機器自動化操作，無需人力，提高效率）
⑥高通量提?。赏瑫r完成幾十甚至幾百個樣品的提?。?/DIV>
⑦無毒無害無污染（試劑中不含任何氯仿、酚等，操作環(huán)境更加安全）
生物磁珠法純化核酸的普及需要磁分離裝置的同步跟進，如磁力架或自動提取儀。目前，各類磁分離裝置主要來自于進口，不僅價格較高，而且售后服務(wù)質(zhì)量也偏低。因此，向大家推薦洛陽惠爾納米科技園自主研發(fā)的磁力架、磁力筆及全自動核酸提取儀，該裝置通過技術(shù)創(chuàng)新，大大提高了靈活機動性，在操作上更加方便快捷，有效解決了磁分離裝置對磁珠法核酸提取的限制，受到科研工作者的一致好評。
標簽：
核酸純化
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