苯在各行業(yè)被廣泛使用，制鞋和箱包工業(yè)中大量使用苯或含苯的溶劑和黏膠劑，在我國尚有此類企業(yè)存在空氣苯嚴(yán)重超標(biāo)的情況。長期以來，對(duì)職業(yè)苯接觸者進(jìn)行暴露評(píng)價(jià)一直采用作業(yè)場(chǎng)所的環(huán)境監(jiān)測(cè)。近年來，發(fā)達(dá)國家逐步采用生物監(jiān)測(cè)技術(shù)檢測(cè)苯接觸的內(nèi)暴露指標(biāo)苯巰基尿酸(SPMA)，并將生物監(jiān)測(cè)與環(huán)境監(jiān)測(cè)相結(jié)合，全面評(píng)價(jià)苯作業(yè)工人的個(gè)體接觸水平。我國至今尚未開展對(duì)職業(yè)接觸苯的生物限值及其檢測(cè)方法的研究，制定該標(biāo)準(zhǔn)有利于對(duì)苯作業(yè)者職業(yè)暴露水平的進(jìn)行客觀評(píng)價(jià)。

　　二、標(biāo)準(zhǔn)使用范圍

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了尿中苯巰基尿酸濃度的檢測(cè)方法，適用于職業(yè)接觸苯工人尿中苯巰基尿酸濃度的測(cè)定。尿中苯巰基尿酸(SPMA)與苯接觸者存在良好相關(guān)性，是低濃度苯接觸特異和敏感的生物標(biāo)志物。目前國外研究機(jī)構(gòu)主要采用高效液相色譜法(HPLC)、液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS、LC-MS/MS)、氣相色譜法(GC)、氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等方法檢測(cè)尿中SPMA。HPLC法是各國職業(yè)衛(wèi)生機(jī)構(gòu)進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)的常用方法。目前國內(nèi)HPLC儀基本普及，利于其作為職業(yè)苯接觸尿中SPMA檢測(cè)方法的應(yīng)用。本法所用儀器在基層單位已普及，方法前處理簡(jiǎn)單易操作，樣品采集、運(yùn)輸、保存方便，色譜操作易于掌握，因此本方法便于推廣應(yīng)用。

　　三、標(biāo)準(zhǔn)制定的方法和依據(jù)

　　本方法原理是尿中苯巰基尿酸(S-phenylmercapturic acid, SPMA)經(jīng)氯仿∶異丙醇(5∶1，v/v)液-液萃取后，經(jīng)ODS柱分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，以SPMA峰保留時(shí)間定性，峰高或峰面積定量。該方法選擇乙腈-0.3%甲酸(25∶75，v/v)為流動(dòng)相，0.3%甲酸可使SPMA色譜峰保留時(shí)間短，而且出峰附近沒有雜質(zhì)峰干擾。對(duì)SPMA全離子峰(掃描范圍：100-300 m/z)可見SPMA分子離子峰([M-H]— m/z238)和一個(gè)碎片峰(m/z109)，其中[M-H]—m/z238為基峰，將其作為定量分析檢測(cè)的離子。該方法最低檢測(cè)限為10µg/L;線性范圍為10～320 µg/L。應(yīng)用該方法對(duì)55名低濃度苯作業(yè)者的現(xiàn)場(chǎng)研究表明，個(gè)體接苯濃度的TWA范圍為0.71～32.17mg/m3，尿中SPMA濃度范圍為10～924µg/L，可滿足10ppm以下苯接觸人群生物監(jiān)測(cè)的需要，特別對(duì)我國苯作業(yè)場(chǎng)所職業(yè)接觸限值TWA =6mg/m3內(nèi)的人群可進(jìn)行有效生物監(jiān)測(cè)與評(píng)價(jià)。

　　本方法用于測(cè)定尿中SPMA不足之處是保留時(shí)間較長，檢測(cè)靈敏度較低，但仍可定量區(qū)分職業(yè)與非職業(yè)苯接觸。本方法選用氯仿∶異丙醇(5∶1，v/v)萃取，實(shí)驗(yàn)表明混合溶劑萃取效率高。流動(dòng)相選用乙腈作為流動(dòng)相A，乙腈-甲醇-三乙胺(磷酸調(diào)節(jié)PH)為流動(dòng)相B，采用梯度洗脫以縮短分析檢測(cè)時(shí)間。柱溫箱溫度設(shè)置在35℃時(shí)，尿樣中樣品峰周圍的雜質(zhì)峰對(duì)SPMA出峰的影響最小，色譜峰分離較完全。方法選擇205nm波長作為檢測(cè)波長，可保證在基線平穩(wěn)的狀態(tài)下，既降低背景干擾、又提高檢測(cè)的靈敏度。尿液PH對(duì)SPMA提取效果影響大，Paci[7]將尿樣先加強(qiáng)酸后加堿液調(diào)節(jié)適宜pH值后用有機(jī)溶劑提取，其機(jī)制是尿中SPMA前體在酸性條件下可水解為SPMA;實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)尿樣pH在1～2時(shí)，SPMA的提取回收率較高。

　　四、標(biāo)準(zhǔn)使用的說明

　　本方法樣品進(jìn)行前處理時(shí)，需要調(diào)節(jié)尿樣使pH<2時(shí)，這時(shí)的SPMA的提取回收率較高。在實(shí)驗(yàn)過程中，在流動(dòng)相B中，當(dāng)調(diào)節(jié)三乙胺溶液的pH=2.16時(shí)，SPMA色譜峰的分離效果較好。將柱溫箱的溫度設(shè)置在35℃時(shí)，尿樣中樣品峰周圍的雜質(zhì)峰對(duì)SPMA出峰的影響最小。在低濃度苯接觸時(shí)吸煙可能存在影響，采樣前一天接觸者應(yīng)避免吸煙。需要注意的是，在中、高濃度的苯接觸時(shí)，班后反-反式粘糠酸(ttMA)與空氣苯濃度的相關(guān)性優(yōu)于苯巰基尿酸(SPMA)。建議在接苯濃度5ppm以下時(shí)可首選尿SPMA為生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)，在5ppm-15ppm首選尿ttMA，在15ppm以上時(shí)兩項(xiàng)指標(biāo)均可選擇。