測定生物體內(nèi)各種微量有機(jī)物的方法很多，大致可分為三類：即物理、化學(xué)、免疫學(xué)方法。在物理學(xué)分析方法中，主要借助于高精度的儀器設(shè)備，如紫外分光光度計(jì)、質(zhì)譜儀、氣相色譜儀和高壓液相色譜儀等。應(yīng)用這些儀器設(shè)備，雖然可以檢出體內(nèi)較微量的有機(jī)物（可檢出范圍在10-6mol/L~10-12mol/L間），但因操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)，而且檢測成本較高，因此不利于在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。

 

     化學(xué)方法主要根據(jù)待測物與其他物質(zhì)的化學(xué)反應(yīng)、產(chǎn)生顏色變化來進(jìn)行。該方法是最早用于定量測定生物體內(nèi)微量有機(jī)物質(zhì)的基本方法。但因其檢出的靈敏度低（要求采樣很多）、特異性差，而且操作麻煩，因此也不利于推廣應(yīng)用。

 

    普通免疫學(xué)測定方法很多，最大的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，其弱點(diǎn)是靈敏度相對較差，而且操作麻煩，不利于進(jìn)行大規(guī)模測定。60年代發(fā)展的RIA技術(shù)在靈敏度方面得到了發(fā)展，可檢出生物體內(nèi)10-6mol/L~10-12mol/L濃度的超微量有機(jī)物。相對而言，RIA技術(shù)是這些免疫測定技術(shù)中較先進(jìn)的一種，因此評價(jià)Elisa技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)時(shí)，常以RIA技術(shù)做參照。

 

    RIA技術(shù)中用作指示劑的標(biāo)記物為放射性同位素，而檢測放射性同位素需要昂貴的儀器設(shè)備和輻射防護(hù)設(shè)備，并需有專門從事放射性同位素工作的實(shí)驗(yàn)室和放射性廢物處理裝置，操作人員的健康常常受放射線照射的威脅。另外，就RIA質(zhì)量而言，盡管目前靈敏度已達(dá)pg/ml水平（即每毫克樣本中含被測物微微克），但不可能有太大的改進(jìn)，因而其發(fā)展前景不大。此外，作為RIA指示劑的某些放射性同位素，由于半衰期短，如32P只有14.3天，33P只有25天，125I只有60天，因而限制了RIA試劑的保存時(shí)間。

 

與RIA技術(shù)比較而言，Elisa技術(shù)在上述方面表現(xiàn)出如下優(yōu)越性：

 

（一）靈敏度高

    雖然酶活性調(diào)節(jié)Elisa方法的靈敏度目前并不十分理想，但在酶活性放大Elisa中，檢測的靈敏度遠(yuǎn)比RIA高。根據(jù)質(zhì)量作用定律。即免疫反應(yīng)所形成的免疫復(fù)合物量與反應(yīng)物濃度成正比。推測所檢測的待測物分子數(shù)為1。已知1個(gè)摩爾濃度含6.02×1023個(gè)分子，那么理論推測酶活性放大Elisa方法的最低檢測限可達(dá)1.7×10-24mol/L。雖然在實(shí)際應(yīng)用中由于反應(yīng)條件和試劑純度以及儀器精度等因素的影響，往往達(dá)不到這個(gè)水平（大于104個(gè)分子），但表明Elisa在靈敏度方面的改進(jìn)潛力是很大的。

 

（二）特異性強(qiáng)

     從免疫反應(yīng)的角度來說，Elisa與RIA的特異性應(yīng)該是一致的。但在Elisa方法中，由于作用檢測指示劑的酶與其底物的反應(yīng)有專一性，從而增加了該方法的特異性。

 

（三）對儀器設(shè)備要求不高，測定成本低

    Elisa測定在普通實(shí)驗(yàn)室便可進(jìn)行，常用的儀器設(shè)備包括加樣器、培養(yǎng)箱、酶標(biāo)專用讀數(shù)器等。按現(xiàn)有價(jià)格折算，酶標(biāo)儀的價(jià)格只及液閃儀的1/6至1/4，因此每測定一個(gè)樣本所需成本不及PIA的1/10至1/16。某些定性Elisa方法，還可在野外進(jìn)行，操作十分方便。

 

（四）方法快速、簡便

     均質(zhì)酶免疫測定方法操作時(shí)，所有反應(yīng)試劑均在同一體系內(nèi)進(jìn)行，不需任何分離步驟，操作十分簡便、快速，數(shù)分鐘便能得出結(jié)果。某些定性Elisa試劑盒，如國外生產(chǎn)的某些奶牛發(fā)情鑒定和妊娠診斷Elisa試劑盒，數(shù)分鐘時(shí)間便能完成一次測定。

 

（五）試劑保存時(shí)間較長

    作為檢測指示劑用的酶和酶標(biāo)記物，在低溫或干燥條件下相對穩(wěn)定，可保存半年至數(shù)年之久。

 

（六）自動(dòng)化程度高

    Elisa由于不存在放射性同位素污染，因此，除加待測樣本需要人工操作外，其他各步驟均可用儀器自動(dòng)化完成。在這種自動(dòng)化條件下，平均每人每天可完成2000余個(gè)樣本的檢測工作。

 

（七）方法種類多

    Elisa技術(shù)可以充分利用單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)，并能利用某些非免疫反應(yīng)試劑（如SPA、凝集素等）的作用，發(fā)展成為許多新方法。此外，發(fā)展Elisa技術(shù)還可以從酶及其底物兩方面著手。這是因?yàn)椋旱谝唬糜贓lisa技術(shù)的酶其種類遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于可用作RIA檢測指示劑的放射性同位素。生物界的酶多種多樣，有希望開發(fā)很多類型的酶用于Elisa，并建立相應(yīng)的Elisa方法。相反，自然界的化學(xué)元素是有限的，放射性同位素的種類更加有限。第二，由于酶的多樣性，酶作用底物也有多種多樣，與此相對應(yīng)的生色源或供氫體的種類也有遠(yuǎn)大的開發(fā)和發(fā)展?jié)摿Α?/DIV>