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研究人員通常會在下游分析中遭遇DNA樣本量有限或不足的問題。QIAGEN的全基因組擴(kuò)增技術(shù)通過以包括單細(xì)胞在內(nèi)的小量樣本或珍貴樣本擴(kuò)增獲得基因組DNA，解決此類難題。REPLI-g Kit能夠準(zhǔn)確地復(fù)制原始DNA樣本，不會造成偏差，擴(kuò)增后的DNA可以直接應(yīng)用于廣泛的遺傳學(xué)分析。 什么是全基因組擴(kuò)增(whole gemome amplification)？ 基于PCR的WGA技術(shù) 基于PCR的WGA技術(shù)主要有兩種：簡并寡核苷酸PCR (DOP-PCR)技術(shù)(1)和擴(kuò)增前引物延伸(PEP)技術(shù)(2)。這兩種技術(shù)之間的主要區(qū)別在于PEP技術(shù)使用隨機(jī)引物和低PCR退火溫度，而DOP-PCR技術(shù)則使用半簡并寡核苷酸（例如CGACTCGAGNNNNNNATGTGG）和更高的退火溫度。兩種方法中都使用了Taq DNA聚合酶，使得擴(kuò)增長度限制在3 kb（平均片段長度為400–500 kb）以內(nèi)，并且會在擴(kuò)增序列中引入一些錯誤。不僅如此，有研究發(fā)現(xiàn)這些技術(shù)的基因組覆蓋度不夠完整，并會在擴(kuò)增中產(chǎn)生偏向性——由于引物優(yōu)先結(jié)合某些特定區(qū)域，造成DNA擴(kuò)增產(chǎn)物中的一些序列相對增多。 多重置換擴(kuò)增的WGA技術(shù) REPLI-g使用了稱為多重置換擴(kuò)增(MDA)的恒溫基因組擴(kuò)增技術(shù)，該技術(shù)包含了隨機(jī)六聚體與變性DNA的結(jié)合過程，以及使用Phi 29聚合酶在恒定溫度下進(jìn)行的鏈置換合成過程。每個置換鏈上添加引物后，形成分枝狀的DNA結(jié)構(gòu)網(wǎng)絡(luò)。Phi 29聚合酶不會從基因組DNA模板上面解離下來，這使得生成的無偏差DNA片段可延伸至100 kb。該酶還具有3’端→5’端的外切酶校正活性，相比基于Taq DNA聚合酶的方法，能夠提供高達(dá)1000倍的保真度（參見上述基于PCR的WGA技術(shù)）。Phi 29聚合酶由獨(dú)特的REPLI-g優(yōu)化緩沖液進(jìn)行支撐，能夠方便的克服如發(fā)卡環(huán)一類的二級結(jié)構(gòu)困難，在擴(kuò)增過程中避免滑脫、定制和聚合酶解離等現(xiàn)象的發(fā)生。這樣無偏差的DNA片段能夠合成至100 kb的長度。 | |
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MDA技術(shù)與基于PCR的WGA方法相比的優(yōu)勢 傳統(tǒng)的基因組DNA擴(kuò)增方法包括費(fèi)時的EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞系建立過程，以及之后使用隨機(jī)或簡并寡核苷酸引物進(jìn)行的PCR全基因組擴(kuò)增步驟。為其他廠商所普遍采用的基于PCR的WGA法，也會產(chǎn)生非特異性的擴(kuò)增干擾以及不完全的位點(diǎn)覆蓋度。某些案例中可能生成短于1 kb長度的DNA片段，在很多后續(xù)應(yīng)用中無法使用。通常情況下，由于使用了低保真度的Taq DNA聚合酶，使生成的DNA中包含了很高的堿基突變率，因此形成了容易出錯的擴(kuò)增，導(dǎo)致如單堿基對突變、STR縮短和擴(kuò)張等不良后果的發(fā)生。REPLI-g則沒有這些缺點(diǎn)，它能對整個基因組進(jìn)行高度均一的擴(kuò)增，反應(yīng)過程中位點(diǎn)序列的偏差及突變率達(dá)到最小。 |
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WGA技術(shù)的應(yīng)用
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TDLA是一種高精密儀器，可識別出氣體混合物中的甲烷、水汽、二氧化碳等組分，同時測出這些組分的濃度，而且可達(dá)到很低的檢測限。TDLA工業(yè)涉及分析化學(xué)、過程化學(xué)、過程工程、多元數(shù)據(jù)分析等多種學(xué)科。TDLA技術(shù)已應(yīng)用于多種場合，如硫回收裝置、煉油廠加熱器、焚燒、排放監(jiān)測、電弧爐、脫硝裝置和各種用途的鍋爐中的氣體分析和天然氣、溫室氣體、肥料(尿素)、清潔氣體等氣體分析。
這份報告從行業(yè)、應(yīng)用和地理位置三個維度對TDLA的市場進(jìn)行了分析。TDLA涉及的行業(yè)包括化工、電力、石油天然氣、紙漿和造紙、化肥、水泥、金屬和環(huán)境產(chǎn)業(yè)。TDLA在尾氣、合成氣、煉油廠燃料氣、天然氣、溫室氣體、火炬氣、肥料揮發(fā)氣體、肥料(尿素)、煤氣、清潔氣體、堿性氧氣轉(zhuǎn)爐氣等氣體檢測和硫回收、煉油廠加熱器、核能、焚燒、催化裂解裝置、排放監(jiān)測、電弧爐、脫硝裝置、焦?fàn)t炭黑生產(chǎn)、鍋爐等設(shè)備中相關(guān)氣體分析中都有應(yīng)用。目前應(yīng)用地區(qū)覆蓋北美、南美、歐洲、亞太地區(qū)及其他地區(qū)。
TDLA市場增長主要源于排放監(jiān)測和焚燒監(jiān)測的需求，集中在石油天然氣、金屬、水泥和電力行業(yè)。新興經(jīng)濟(jì)體的發(fā)展需求是TDLA市場增長的重要機(jī)會。
TDLA的主要供應(yīng)商有德國西門子、瑞士ABB、(德國)、梅特勒-托萊多、日本橫河、英國Servomex、挪威NeoMonitors、瑞士Endress+Hauser集團(tuán)、德國西克麥哈克等。
