高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)規(guī)范(試行)
為規(guī)范高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)臨床應(yīng)用工作，制定本規(guī)范。該規(guī)范主要包括高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷的適用范圍、臨床服務(wù)流程和質(zhì)量控制等內(nèi)容。
第一部分 適用范圍
一、適用目標(biāo)疾病
根據(jù)目前技術(shù)發(fā)展水平，高通量基因測序技術(shù)在產(chǎn)前篩查與診斷領(lǐng)域適用的目標(biāo)疾病為常見胎兒染色體非整倍體異常(即 21 三體綜合征、18 三體綜合征、13 三體綜合征)。
二、適用時(shí)間
高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷時(shí)間應(yīng)當(dāng)為12+0-26+6周，最佳檢測時(shí)間應(yīng)當(dāng)為12+0-26+6周。
三、適用人群
(一)血清學(xué)篩查、影像學(xué)檢查顯示為常見染色體非整倍體臨界風(fēng)險(xiǎn)(即 1/1000≤唐氏綜合征風(fēng)險(xiǎn)值<1/270，1/1000≤18 三體綜合征風(fēng)險(xiǎn)值<1/350)的孕婦。
(二)有介入性產(chǎn)前診斷禁忌證者(先兆流產(chǎn)、發(fā)熱、有出血傾向、感染未愈等)。
(三)就診時(shí)，患者為孕 20+6周以上，錯(cuò)過血清學(xué)篩查最佳時(shí)間，或錯(cuò)過常規(guī)產(chǎn)前診斷時(shí)機(jī)，但要求降低 21 三體綜合征、18 三體綜合征、13 三體綜合征風(fēng)險(xiǎn)的孕婦。
四、慎用人群
有以下幾種情形的孕婦屬于慎用人群，即在該人群中本檢測的篩查效果較適用人群有一定程度下降，即篩查的檢出率下降，假陽性及假陰性率上升，或已符合介入性產(chǎn)前診斷的指征，知情后拒絕直接選擇介入性產(chǎn)前診斷的孕婦。包括：
(一)產(chǎn)前篩查高風(fēng)險(xiǎn)，預(yù)產(chǎn)期年齡≥35 歲的高齡孕婦，以及有其他直接產(chǎn)前診斷指征的孕婦。
(二)孕周<12 周的孕婦。
(三)高體重(體重>100 千克)孕婦。
(四)通過體外受精-胚胎移植(以下簡稱 IVF-ET)方式受孕的孕婦。
(五)雙胎妊娠的孕婦。
(六)合并惡性腫瘤的孕婦。
五、不適用人群
(一)染色體異常胎兒分娩史，夫婦一方有明確染色體異常的孕婦。
(二)孕婦 1 年內(nèi)接受過異體輸血、移植手術(shù)、細(xì)胞治療或接受過免疫治療等對高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷結(jié)果將造成干擾的。
(三)胎兒影像學(xué)檢查懷疑胎兒有微缺失微重復(fù)綜合征或其他染色體異常可能的。
(四)各種基因病的高風(fēng)險(xiǎn)人群。
六、其他
(一)對未接受中孕期血清學(xué)篩查而直接進(jìn)行高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷的孕婦，應(yīng)當(dāng)在孕 15 周至 20+6周期間進(jìn)行胎兒神經(jīng)管缺陷風(fēng)險(xiǎn)評估。
(二)嚴(yán)禁高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷用于非醫(yī)學(xué)需要的胎兒性別鑒定。
第二部分 臨床服務(wù)流程
一、臨床技術(shù)程序
(一)凡符合適用人群標(biāo)準(zhǔn)并自愿進(jìn)行此項(xiàng)檢測的孕婦，或符合慎用人群標(biāo)準(zhǔn)但強(qiáng)烈要求進(jìn)行此項(xiàng)檢測的孕婦，醫(yī)師應(yīng)當(dāng)對孕婦本人及其家屬詳細(xì)告知該檢測的目標(biāo)病種、目的、意義、準(zhǔn)確率、風(fēng)險(xiǎn)和局限性，以及檢測的種類、費(fèi)用和技術(shù)流程。
(二)在孕婦充分了解以上事項(xiàng)后，產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)收集孕婦病史、簽署知情同意書、采集外周血，根據(jù)檢測結(jié)果，生物信息學(xué)分析，確定胎兒是否有相應(yīng)非整倍體綜合征高風(fēng)險(xiǎn)。
(三)醫(yī)師應(yīng)當(dāng)對孕婦提供檢測后臨床咨詢及高風(fēng)險(xiǎn)孕婦的后續(xù)處理，在知情同意的前提下對高風(fēng)險(xiǎn)孕婦進(jìn)行產(chǎn)前診斷，并負(fù)責(zé)隨訪妊娠結(jié)局。
二、知情同意書簽署
(一)產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)只對已簽署知情同意書，同意參加該檢測的孕婦進(jìn)行檢測。
(二)醫(yī)師在孕婦簽署知情同意書時(shí)應(yīng)當(dāng)告知當(dāng)事人以下要點(diǎn)(知情同意書模板見附圖 1)：
1. 對存在產(chǎn)前診斷指征的孕婦建議其優(yōu)先選擇介入性產(chǎn)前診斷。
2. 告知該檢測能檢出的目標(biāo)疾病種類。
3. 告知該檢測能夠達(dá)到的檢出率、假陽性率，強(qiáng)調(diào)該檢測結(jié)果不能視為產(chǎn)前診斷，高風(fēng)險(xiǎn)結(jié)果必須行介入性產(chǎn)前診斷確診;以及低風(fēng)險(xiǎn)結(jié)果具有假陰性的可能性。
4. 告知該檢測有失敗的風(fēng)險(xiǎn)，可能會(huì)要求重新采血。
5. 根據(jù)知情同意書內(nèi)容告知該檢測的局限性。
6. 根據(jù)知情同意書內(nèi)容告知影響該檢測的因素。
7. 醫(yī)生對病例個(gè)案認(rèn)為應(yīng)該說明的相關(guān)問題。
三、檢測申請單填寫
(一)醫(yī)師應(yīng)當(dāng)詢問孕產(chǎn)史、孕周、胎數(shù)和已進(jìn)行的其他產(chǎn)前檢測、產(chǎn)前篩查或產(chǎn)前診斷的結(jié)果，以及詢問是否進(jìn)行過細(xì)胞治療、異體輸血或是否為腫瘤患者等情況(申請單參考格式見附圖 2)。
(二)醫(yī)師應(yīng)當(dāng)協(xié)助孕婦準(zhǔn)確填寫檢測申請單上的內(nèi)容，包括：孕婦姓名、出生日期、采血時(shí)體重、孕婦通訊地址和聯(lián)系電話、末次月經(jīng)日期、篩查孕周、早孕或中孕期血清學(xué)篩查結(jié)果等。
四、臨床標(biāo)本的采集
(一)采用唯一編號對采血管進(jìn)行編號。建議采血管采用條形碼作為編號標(biāo)示，該編號應(yīng)當(dāng)與知情同意書和送檢單上的編號一致。
(二)按照無菌操作要求，采取孕婦靜脈血;樣本處理按試劑盒說明書要求進(jìn)行。
(三)標(biāo)本的貯存和運(yùn)輸。
1. 已分離的血漿標(biāo)本運(yùn)輸：在 4-8℃冷藏條件，冷鏈運(yùn)輸，運(yùn)輸時(shí)間不得超過 4 小時(shí);在 0 攝氏度以下的冷凍運(yùn)輸不應(yīng)超過 72 小時(shí)。
2. 已分離的血漿標(biāo)本長期保存應(yīng)在-70℃，保存過程中避免反復(fù)凍融。
五、檢測報(bào)告的審核發(fā)放
(一)自抽取孕婦外周血至出具檢測報(bào)告的周期不應(yīng)當(dāng)超過 15 個(gè)工作日，其中發(fā)出因檢測失敗須再次采樣的通知不應(yīng)當(dāng)長于 10 個(gè)工作日。
(二)檢測報(bào)告須經(jīng)由 1 名具備產(chǎn)前診斷臨床資質(zhì)的副高級以上職稱醫(yī)務(wù)人員審核并簽發(fā)(報(bào)告參考格式見附圖 3)。
(三)檢測報(bào)告應(yīng)當(dāng)以書面報(bào)告形式告知受檢者，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)通知受檢者或其家屬獲取該報(bào)告的地點(diǎn)和時(shí)間。
(四)報(bào)告應(yīng)當(dāng)包括以下信息：
1. 孕婦的姓名、年齡、孕周、末次月經(jīng)時(shí)間。
2. 樣本編號、樣本狀態(tài)、采樣日期和報(bào)告日期。
3. 檢測項(xiàng)目、檢測方法。
4. 每一種目標(biāo)疾病的檢測值，正常參考范圍。
5. 以目標(biāo)疾病的低風(fēng)險(xiǎn)或高風(fēng)險(xiǎn)作為結(jié)果報(bào)告。
6. 檢測者、審核者。
7. 其他相關(guān)提示。
(五)對高風(fēng)險(xiǎn)結(jié)果的孕婦，試點(diǎn)產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)盡快通過電話或短信息等方式專門通知，建議該孕婦進(jìn)行后續(xù)產(chǎn)前診斷，并做好追蹤隨訪。
六、檢測后的臨床咨詢及高風(fēng)險(xiǎn)孕婦的后續(xù)處理
(一)對結(jié)果為低風(fēng)險(xiǎn)的孕婦，應(yīng)當(dāng)提示此檢測并非最終診斷，不排除漏檢的可能，且不能排除其他染色體疾病。
(二)對結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦，應(yīng)當(dāng)建議其進(jìn)行后續(xù)介入性產(chǎn)前診斷;不應(yīng)當(dāng)僅根據(jù)本檢測高風(fēng)險(xiǎn)的結(jié)果做終止妊娠的建議和處理。
(三)試點(diǎn)產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)負(fù)責(zé)高風(fēng)險(xiǎn)病例的后續(xù)臨床咨詢和產(chǎn)前診斷，臨床咨詢率應(yīng)達(dá) 100%，產(chǎn)前診斷率應(yīng)達(dá) 95%以上。
(四)如果存在胎兒影像學(xué)檢查異常，無論該檢測結(jié)果是低風(fēng)險(xiǎn)還是高風(fēng)險(xiǎn)，都應(yīng)當(dāng)對其進(jìn)行專業(yè)的遺傳咨詢及后續(xù)相應(yīng)診斷服務(wù)。
七、檢測后妊娠結(jié)局的追蹤隨訪
(一)試點(diǎn)產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)對所有檢測高風(fēng)險(xiǎn)對象進(jìn)行妊娠結(jié)局(包括后期流產(chǎn)、引產(chǎn)、早產(chǎn)或足月分娩等)的追蹤隨訪，隨訪率應(yīng)達(dá) 100%，失訪率宜小于 10%。
(二)試點(diǎn)產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)對于檢測低風(fēng)險(xiǎn)對象妊娠結(jié)局的隨訪率應(yīng)大于 90%，隨訪時(shí)限應(yīng)為胎兒出生后 12 周內(nèi)(建議有條件的試點(diǎn)產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)隨訪至產(chǎn)后 1 年)。
(三)隨訪內(nèi)容包括：妊娠結(jié)局、胎兒或新生兒是否為21 三體綜合征、18 三體綜合征、13 三體綜合征患兒以及其他臨床診斷和/或遺傳學(xué)診斷(建議有條件的產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)對后期自發(fā)流產(chǎn)、死胎、致死性的早產(chǎn)胎兒開展遺傳學(xué)診斷，作為妊娠結(jié)局隨訪的一部分內(nèi)容)。
八、資料與標(biāo)本的保存
高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷工作相關(guān)資料，包括檢測送檢單、知情同意書以及相關(guān)的數(shù)據(jù)信息均應(yīng)當(dāng)在產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)保存 3 年以上，剩余血漿樣本應(yīng)保存至產(chǎn)后 2 年以上。
第三部分 臨床質(zhì)量控制
一、21 三體綜合征檢出率應(yīng)不低于 99%，18 三體綜合征檢出率應(yīng)不低于 97%，13 三體綜合征檢出率應(yīng)不低于 90%;復(fù)合假陽性率應(yīng)不高于 0.5%;復(fù)合陽性預(yù)測值應(yīng)不低于 50%。
二、試點(diǎn)產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)按季度報(bào)送臨床應(yīng)用試點(diǎn)工作量及篩查結(jié)果，包括篩查檢出率、假陽性率、陽性預(yù)測值和檢出 21 三體綜合征、18 三體綜合征、13 三體綜合征病例數(shù)、發(fā)生的假陽性和假陰性病例數(shù)等數(shù)據(jù)信息。具體報(bào)表見附圖 4。
附圖：1. 高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷知情同意書(參考模板)
2. 高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷臨床申請單(參考模板)
3. 高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷臨床報(bào)告單(參考模板)
4. 高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷臨床應(yīng)用試點(diǎn) 工作情況報(bào)表
