一、實驗?zāi)康?nbsp;
1.了解植物組織中葉綠素的分布及性質(zhì)。
2.掌握測定葉綠素含量的原理和方法。
二、實驗原理:葉綠素的含量測定方法有多種,其中主要有:1.原子吸收光譜法:通過測定鎂元素的含量,進而間接計算葉綠素的含量。2.分光光度法:利用分光光度計測定葉綠素提取液在最大吸收波長下的吸光值,即可用朗伯—比爾定律計算出提取液中各色素的含量。葉綠素a和葉綠素b 在645nm 和663nm 處有最大吸收,且兩吸收曲線相交于652nm 處。因此測定 提取液在645nm、663nm、652nm 波長下的吸光值,并根據(jù)經(jīng)驗公式可分別計算出葉綠素a、葉綠素b 和總?cè)~綠素的含量。
三、操作步驟 :取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或干材料,擦凈組織表面污物,去除中脈剪碎。稱取剪碎的新鮮樣品2g,放入研缽中,加少量石英砂和碳酸鈣粉及3mL95%乙醇,研成均漿,再加乙醇10mL,繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3~5min。 取濾紙1張置于漏斗中,用乙醇濕潤,沿玻棒把提取液倒入漏斗,濾液流至100mL 棕色容量瓶中;用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數(shù)次,最后連同殘渣一起倒入漏斗中。 用滴管吸取乙醇,將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。最后用乙醇定容至100mL,搖勻。 取葉綠體色素提取液在波長665nm、645nm 和652nm 下測定吸光度,以95%乙醇為空白對照。