①超凈工作臺:
超凈工作臺的種類很多,有單面單人、單面雙人、雙面雙人或雙面四人等,其工作原理是利用鼓風機,使通過高效濾氣的空氣,徐徐通過臺面,這樣使工作環(huán)境中具無菌而均勻的空氣。
根據(jù)層流方式的不同,超凈工作臺主要分為水平層流式和垂直層流式兩種,基本原理大致相同,都是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾,由離心風機壓入靜壓箱,再經(jīng)高效空氣過濾器,由此送出的潔凈氣流從一定的均勻的斷面風速通過無菌,從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環(huán)境。但兩種凈化臺的氣流方向不同。
使用超凈工作臺應注意的幾點問題:
A.凈化工作臺最好安裝在無塵的房間內(nèi),最好為隔離好的無菌間內(nèi),以免塵土過多易使濾器阻塞,降低凈化效果,縮短使用壽命。
B.新安裝的或長期未使用的工用臺,工作前必須對工作臺和周圍環(huán)境用真空吸塵器或不產(chǎn)生纖維的工具進行清潔工作,再采用藥物滅菌法或紫外線滅菌法進行滅菌處理。
C.每次使用工作臺時,應先用75%酒精擦洗臺面,并提前以30~50min紫外線滅菌燈處理凈化工作區(qū)內(nèi)積累的微生物。在關(guān)閉紫外燈后應啟動送風機使之運轉(zhuǎn)兩分鐘后再進行培養(yǎng)操作。
D.凈化工作區(qū)內(nèi)不應存放不必要的物品,以保持潔凈氣流型不受干擾。
E.一般情況下,高效過濾器三年更換一次。更換高效濾器應請專業(yè)人員操作,以保持密封良好。要定期將粗過濾器中的過布(無紡布)拆下清洗,時間應根據(jù)環(huán)境潔凈程度而定,通常間隔3~6個月進行一次。
F.每次使用凈化臺要及時清除工作臺面上的物品,并用灑精擦洗臺面使之始終保持潔凈。
②4℃冰箱和低溫冰箱;
③CO2培養(yǎng)箱:
A.一定濃度的CO2對細胞生長,尤其是原代培養(yǎng)和單細胞培養(yǎng)有促進作用(5%)。
B.一定濃度的CO2可維持培養(yǎng)液恒定的pH。適用于開放培養(yǎng),培養(yǎng)箱封口后,可在一般恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),但是采用培養(yǎng)皿或多孔板培養(yǎng)時,則需要高濕度和高CO2含量的空氣。
C.它增加了濕度,箱體內(nèi)裝有水浴,可以保證培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度。
D.培養(yǎng)箱內(nèi)裝有紫外燈。
E.通過氣體流量計可以調(diào)節(jié)CO2和空氣的比例。
F.在水中可加入防腐劑(二氧乙酸)??煞乐挂駽O2培養(yǎng)箱中濕度較高,易長霉菌。
④臭氧發(fā)生器;
④離心機;
⑤CO2鋼瓶;
⑥液氮罐;
⑦儲品柜:用來存放雜物;
⑧紫外燈;
⑨空氣凈化系統(tǒng);
⑩倒置顯微鏡;
3.無菌操作
(1)無菌室的滅菌:
①紫外燈無人時就要打開;
②進無菌室要穿無菌服、戴帽子和口罩;
③每周清洗消毒一次;
④所用物品要以外科手術(shù)方式嚴格消毒;
⑤室內(nèi)臺面要要保持潔凈,做完實驗后,用75%酒精或千分之三新潔爾滅棉球擦拭超凈工作臺的臺內(nèi)、邊臺的臺面、倒置顯微鏡的載物臺等;
⑥所用物品要一次性準備好;
⑦瓶口要用酒精火焰消毒;
⑧盡量減少出入。
(2)實驗人員的無菌準備:
①肥皂洗手
②穿好隔離衣
③酒精棉球擦手
細胞培養(yǎng)室必備的設(shè)備有:
1. 超凈臺;
2. 二氧化碳培養(yǎng)箱;
3. 倒置顯微鏡;
4. 二氧化碳壓縮氣體;
5. 液氮罐;
6.低溫冰箱(-20度和-70度);
7. 過濾裝置;
8. 離心機;
9. 酶標儀等等。
試劑和小的工器具也很多,如:培養(yǎng)基、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、移液槍、酸缸、滴管、離心管、血球計數(shù)板、DMO、PBS、胰酶等等。
細胞培養(yǎng)室,最好選擇獨立房間,超凈臺應放置在比較潔凈的房間,如果條件允許,最好按潔凈廠房要求設(shè)計細胞培養(yǎng)室,即使房間做不到空氣過濾,也至少應是專用的,進出時要更換工作衣。