(一)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置
組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與其他一般實(shí)驗(yàn)室工作的主要區(qū)別在于要求保持無(wú)菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。目前,超凈工作臺(tái)的廣泛使用,很大程度上方便了組織細(xì)胞培養(yǎng)工作,并使一些常規(guī)實(shí)驗(yàn)室有可能用于進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能進(jìn)行六方面的工作:無(wú)菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲(chǔ)藏。
01
無(wú)菌操作區(qū)
(1)無(wú)菌操作室:無(wú)菌操作區(qū)只限于細(xì)胞培養(yǎng)及其他無(wú)菌操作的區(qū)域,最好能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。 理想的無(wú)菌操作室應(yīng)劃為三部分:
a) 更衣室—―供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b) 緩沖間—―位于更衣間與操作間之間,目的是為了保證操作間的無(wú)菌環(huán)境,同時(shí)可放置恒溫培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。
c) 無(wú)菌操作間—―專用于無(wú)菌操作、細(xì)胞培養(yǎng)。其大小要適當(dāng),且其頂部不宜過(guò)高(不超過(guò)2.5m)以保證紫外線的有效滅菌效果;墻壁光滑無(wú)死角以便清潔和消毒。工作臺(tái)安置不應(yīng)靠墻壁,臺(tái)面要光滑壓塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。
無(wú)菌操作間的空氣消毒:
紫外線燈—-產(chǎn)生臭氧,并且室內(nèi)溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康。 空氣過(guò)濾的恒溫恒濕裝置—-最好。
表1 潔凈室(區(qū))空氣潔凈度級(jí)別表
潔凈度級(jí)別
塵粒最大允許數(shù)/立方米
微生物最大允許數(shù)
微生物最大允許數(shù)
微生物最大允許數(shù)
100級(jí)
3,500
0
5
1
10000級(jí)
350,000
2,000
100
3
10000級(jí)
3,500,000
20,000
500
10
10000級(jí)
10,350,000
60,000
-
15
無(wú)臭氧紫外線消毒器
電子消毒滅菌器—-在高壓電場(chǎng)作用下,電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強(qiáng)烈電子轟擊,使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧是一種強(qiáng)氧化劑,能同細(xì)菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進(jìn)行氧化分解反應(yīng),從而靠臭氧氣體彌漫性擴(kuò)散達(dá)到殺菌之目的,消毒時(shí)沒(méi)有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需30~40min即能自行還原成氧氣,空氣不留異味,消毒物體表面不留殘毒。
(2)凈化工作臺(tái):操作簡(jiǎn)單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細(xì)菌培養(yǎng)室使用的凈化工作臺(tái)主要有兩種:a)側(cè)流式或稱垂直式 b)外流式或稱水平層流式。
凈化工作臺(tái)工作原理(大致相同)—-通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過(guò)濾器初濾,由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱,再經(jīng)高效空氣過(guò)濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風(fēng)速通過(guò)無(wú)菌區(qū),從而形成無(wú)塵無(wú)菌的高潔凈度工作環(huán)境。
側(cè)流式工作臺(tái)—-空氣凈化后的氣流由左或右側(cè)通過(guò)工作臺(tái)面流向?qū)?cè),也有從上向下或從下向上流向?qū)?cè),形成氣流屏障保持工作區(qū)無(wú)菌。工作臺(tái)結(jié)構(gòu)為封閉式。
外流式(水平式)工作臺(tái)—-凈化后的空氣面向操作者流動(dòng),因而外方氣流不致混入操作,但進(jìn)行有害物質(zhì)實(shí)驗(yàn)操作則對(duì)操作者不利。工作臺(tái)結(jié)構(gòu)為開(kāi)放式(已少用)。
凈化工作臺(tái)應(yīng)用注意:
(1)凈化工作臺(tái)應(yīng)安裝在隔離好的無(wú)菌間或清潔無(wú)塵的房間內(nèi),以免塵土過(guò)多易使過(guò)濾器阻塞,降低凈化效果,縮短其使用壽命。
(2)新安裝的或長(zhǎng)期未使用的工作臺(tái),工作前必須對(duì)工作臺(tái)和周圍環(huán)境用真空吸塵器或不產(chǎn)生纖維的工具進(jìn)行清潔工作,然后再采用藥物滅菌法或紫外線滅菌進(jìn)行滅菌處理。
(3)使用凈化工作臺(tái)前,應(yīng)先用75%酒精擦洗臺(tái)面,并提前以紫外線滅菌燈照射30~50min處理凈化工作區(qū)內(nèi)積存的微生物。關(guān)閉滅菌燈后應(yīng)啟動(dòng)風(fēng)機(jī)使之運(yùn)轉(zhuǎn)兩分鐘后再進(jìn)行培養(yǎng)操作。
(4)凈化工作區(qū)內(nèi)不應(yīng)存放不必要的物品,以保持潔凈氣流流型不受干擾。
(5)注意凈化區(qū)內(nèi)氣流的變化,一旦感到氣流變?nèi)酰缇凭珶艋鹧娌粍?dòng),加大電機(jī)電壓仍未見(jiàn)情況改變則說(shuō)明濾器已被阻塞,應(yīng)及時(shí)更換。一般情況下,高效過(guò)濾器三年更換一次。更換高過(guò)濾器應(yīng)請(qǐng)專業(yè)人員操作,以保持密封良好。粗過(guò)濾器中的過(guò)濾布(無(wú)紡布)應(yīng)定期清洗更換,時(shí)間應(yīng)根據(jù)工作環(huán)境潔凈程度而定,通常間隔3-6個(gè)月進(jìn)行一次。
(6)凈化工作臺(tái)使用完畢應(yīng)及時(shí)清理工作臺(tái)面上的物品并用酒精擦洗臺(tái)面使之始終保持潔凈。
(7)凈化工作臺(tái)應(yīng)定期進(jìn)行功能測(cè)試,檢查凈化工作臺(tái)各項(xiàng)工作指標(biāo)是否達(dá)到要求,例如進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn),定期檢查臺(tái)面空氣的潔凈度是否達(dá)標(biāo)。
超凈工作臺(tái)的無(wú)菌程度檢查超凈工作臺(tái)在消毒處理后,無(wú)菌試驗(yàn)前及操作過(guò)程中需檢查空氣中菌落數(shù);取直徑約90mm平皿,在超凈工作臺(tái)內(nèi)點(diǎn)燃酒精燈,在酒精燈旁,以無(wú)菌操作,將平皿半開(kāi)注入溶化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約20ml,制成平板,在30~35℃預(yù)培養(yǎng)48小時(shí),證明無(wú)菌后將平板3個(gè),以無(wú)菌方式帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)左、中、右各放一個(gè);打開(kāi)平皿蓋扣置,平板在空氣中暴露30分鐘后將平皿蓋蓋好,置30~35℃培養(yǎng)48小時(shí),取出檢查,100級(jí)清潔度要求:3個(gè)平皿上生長(zhǎng)的菌落數(shù)平均不得超過(guò)1個(gè)。
超凈工作臺(tái)應(yīng)定期請(qǐng)有關(guān)部門(mén)檢查其潔凈度,應(yīng)達(dá)到100級(jí)(一般用塵埃粒子計(jì)數(shù)儀)檢測(cè)塵埃粒徑≤5祄的粒數(shù)不得超過(guò)3.5個(gè)/升;空氣流量應(yīng)控制在0.75~1.0m3/s;細(xì)菌菌落數(shù)平均<1個(gè),可根據(jù)無(wú)菌狀況必要時(shí)置換過(guò)濾器。
02
孵育區(qū)
本區(qū)對(duì)無(wú)菌的要求雖不比無(wú)菌區(qū)嚴(yán)格,但仍需清潔無(wú)塵,因此也應(yīng)設(shè)置在干擾少而非來(lái)往穿行的區(qū)域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進(jìn)行,后者費(fèi)用高,一般實(shí)驗(yàn)室多采用孵箱進(jìn)行工作。
03
制備區(qū)
在該區(qū)主要進(jìn)行培養(yǎng)液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體等的制備。
04
儲(chǔ)藏區(qū)
主要存放各類冰箱、干燥箱、液氮罐、無(wú)菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等,此環(huán)境也需要清潔無(wú)塵。
05
清洗和消毒滅菌區(qū)
清潔和消毒滅菌區(qū)應(yīng)與其他區(qū)域分開(kāi),主要進(jìn)行所有細(xì)胞培養(yǎng)器皿的清洗、準(zhǔn)備、消毒及三蒸水制備等工作。
(二)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備
組織細(xì)胞培養(yǎng)室除一般實(shí)驗(yàn)室的普通常規(guī)設(shè)備外,尚有一些特殊需要的設(shè)備?;究煞譃閮纱箢悾旱谝活悶槌S玫幕驹O(shè)備;第二類為較高級(jí)的特殊設(shè)備。
01
常用的基本設(shè)備
(1) 儀器:
a)顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細(xì)胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一,便于掌握細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并觀察有無(wú)污染等。
——若有條件,尚可配置帶有照相系統(tǒng)的高質(zhì)量相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統(tǒng)或縮時(shí)電影拍攝裝置等,以便隨時(shí)觀察、記錄、攝影細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
a) 培養(yǎng)箱:體外培養(yǎng)的細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞一樣,需要在恒定的溫度下生存,大多數(shù)情況下,最適溫度是37℃,溫差變化一般不應(yīng)超過(guò)±0.5℃,細(xì)胞在溫度升高2℃ 時(shí),持續(xù)數(shù)小時(shí)即不能耐受,40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱,如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱。
恒溫培養(yǎng)箱——應(yīng)選隔水式或晶體管自控溫培養(yǎng)箱,此類培養(yǎng)箱靈敏度高,溫度控制較穩(wěn)定。一般的恒溫培養(yǎng)箱價(jià)格較便宜,其缺點(diǎn)是只宜于作密閉式培養(yǎng)。
CO2培養(yǎng)箱——目前多數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)室已廣泛使用。CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點(diǎn)是能夠提供進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所需要的一定量的CO2(常用濃度為5%),易于使培養(yǎng)液的pH保持穩(wěn)定,適用于開(kāi)放或半開(kāi)放培養(yǎng)。培養(yǎng)細(xì)胞的器皿可用培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶;當(dāng)使用培養(yǎng)瓶時(shí),可將瓶蓋略微旋松,使培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)與外界保持通氣狀態(tài)。由于這種培養(yǎng)方法培養(yǎng)器皿內(nèi)部與外界相通,培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須保持清潔,應(yīng)定期以紫外線照射或酒精消毒。同時(shí)培養(yǎng)箱應(yīng)放置盛有無(wú)菌蒸餾水的水槽,防止培養(yǎng)液蒸發(fā),使箱內(nèi)相對(duì)濕度始終保持為100%。
c)干燥箱:用于細(xì)胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒。干熱消毒時(shí),電熱干燥箱升溫較高,一般需達(dá)到160℃以上。通常使用鼓風(fēng)式電熱干燥箱。其優(yōu)點(diǎn)是溫度均勻、效果較好,缺點(diǎn)是升溫過(guò)程較慢。升溫時(shí)不能先升溫后鼓風(fēng)而應(yīng)鼓風(fēng)與升溫同時(shí)開(kāi)始,至100℃時(shí),停止鼓風(fēng),應(yīng)避免包裹器皿的紙或棉花燒焦,燒焦的碎屑可影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。消毒后,不能立即打開(kāi)箱門(mén)以免驟冷而導(dǎo)致玻璃器皿損壞,應(yīng)等候溫度自然下降至100℃以下方可開(kāi)門(mén)。
d)水純化裝置:細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)水的質(zhì)量要求較高,細(xì)胞培養(yǎng)以及與細(xì)胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴(yán)格純化處理。水純化時(shí)可采用離子交換裝置或蒸餾器。離子交換純水尚不能有效去除有機(jī)物,因此用水時(shí)尚需再次蒸餾。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水:即使是用于玻璃器皿的沖洗,也應(yīng)使用二次以上蒸餾水。
目前國(guó)內(nèi)使用較多的是自動(dòng)雙重純水蒸餾器(石英管加熱),使用方便,安全、蒸餾速度快(1600ml/h)。
使用注意:
○a不可采用普通自來(lái)水蒸餾,以免蒸餾器內(nèi)很快結(jié)成水垢影響蒸餾效果;同時(shí),還需視蒸餾器內(nèi)存水垢程度定期徹底清洗蒸餾器。
○b正確的使用方法是將經(jīng)金屬蒸餾器蒸餾的蒸餾水加入玻璃蒸餾器內(nèi)進(jìn)行再次蒸餾。 一般配制培養(yǎng)液的用水應(yīng)在配液前蒸餾,不宜使用存放數(shù)日的三蒸水,以免影響培養(yǎng)用水的質(zhì)量。
目前市場(chǎng)上供應(yīng)的是含有各種級(jí)別和類型的采用一種或多種純化方法相結(jié)合的使普通水純化為純水和超純水的純水系統(tǒng)可供選擇。例如:設(shè)計(jì)靈活的可以掛壁、也可為臺(tái)式,也可以有儲(chǔ)水箱、也可直接用分液槍的純水裝置;還可根據(jù)各類實(shí)驗(yàn)用水需求選擇配備有效殺菌或去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等,甚至可有效去除掉熱原、內(nèi)毒素的超濾型純水器。
e)冰箱:細(xì)胞培養(yǎng)室必須配備
○a普通冰箱或冷藏柜
——儲(chǔ)存培養(yǎng)液、生理鹽水、Hank’s液試劑等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標(biāo)本。
○b低溫冰箱(-20℃)、超低溫冰箱
——用于儲(chǔ)存需要冷凍保存生物活性及較長(zhǎng)時(shí)期存放的制劑,如酶、血清等。
——細(xì)胞培養(yǎng)室的冰箱應(yīng)屬專用,不得存放易揮發(fā)、易燃燒等對(duì)細(xì)胞有害的物質(zhì),且應(yīng)保持清潔。
f)細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器:儲(chǔ)存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購(gòu)置液氮容器時(shí)要綜合考慮容積大小,取放使用方便及液氮揮發(fā)量(經(jīng)濟(jì))三種因素。液氮容器的大小可自25L~500L,可以儲(chǔ)存1ml的安瓿250~15000個(gè)左右。液氮溫度可低達(dá)-196℃,使用時(shí)應(yīng)防止凍傷。由于液氮不斷揮發(fā),應(yīng)注意觀察存留液氮情況,及時(shí)定期補(bǔ)充液氮,避免揮發(fā)過(guò)多而致細(xì)胞受損。
目前,國(guó)內(nèi)各類實(shí)驗(yàn)室已廣泛使用新型的細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器。市場(chǎng)所提供的各種新型的細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器具有性能優(yōu)異,使用方便等特點(diǎn)。
例如:
——可通過(guò)先進(jìn)的電子控制器實(shí)現(xiàn)凍存自動(dòng)化并監(jiān)測(cè)液氮水平和樣品溫度,確保樣品溫度始終處于設(shè)定溫度點(diǎn);
——可配備先進(jìn)的報(bào)警系統(tǒng),分別警報(bào)液氮液面、溫度、電池、電壓、電源等失常情況:
——同時(shí)具備熱氣體旁路系統(tǒng),防止高于-130℃的暖空氣進(jìn)入液氮罐,從而更有效地保護(hù)樣品,防止升溫。
另外,多種規(guī)格的先進(jìn)液氮運(yùn)輸,供應(yīng)罐系列不僅移動(dòng)方便,還可通過(guò)連接管給儲(chǔ)存罐補(bǔ)充液氮,提高工作效率,保證樣品安全。
g)離心機(jī):進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),常規(guī)需要進(jìn)行制備細(xì)胞懸液、調(diào)整細(xì)胞密度、洗滌、收集細(xì)胞等工作,通常需要使用離心機(jī)。
○a一般可常規(guī)配置4000rpm的國(guó)產(chǎn)臺(tái)式離心機(jī),例如細(xì)胞沉降,使用80~100g的離心機(jī)即可,離心力過(guò)大有時(shí)可能引起細(xì)胞的損傷。
○b另外,可根據(jù)需要添置其他類型如大容量或可調(diào)節(jié)溫度的離心機(jī)等
○c若需特殊用途,例如某些細(xì)胞的分離制備需梯度離心,則需另行配置實(shí)驗(yàn)所需的具備其他特殊功能的離心機(jī)。
h)天平:常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
分析天平的感量為0.1mg、0.01mg和0.001mg。根據(jù)稱取物質(zhì)的量和稱量精度的要求,選擇適宜級(jí)別的天平。要求精密稱定時(shí),當(dāng)取樣量大于100 mg 選用感量為0.1mg天平,在100-10 mg 選用感量為0.01mg 天平,小于10mg選用感量為0.001 mg天平 。
i)消毒器:直接或間接與細(xì)胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。
常用:
○a手提式高壓蒸汽消毒器
○b目前市場(chǎng)上,具有高效、安全、方便等性能,適用于各種器皿、液體、培養(yǎng)基的高壓滅菌裝置已在流通(如脈動(dòng)真空滅菌器)。可供使用者在滅菌的同時(shí)監(jiān)測(cè)滅菌容器內(nèi)的壓力和溫度,確保滅菌質(zhì)量和安全,并可通過(guò)記憶(儲(chǔ)存)支持系統(tǒng)改變各種參數(shù)(例如滅菌、排氣、加熱等參數(shù)),即使在進(jìn)行滅菌時(shí)發(fā)生停電故障,仍可保留所設(shè)定的參數(shù)
j)濾器:目前細(xì)胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液,包括人工合成培養(yǎng)液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長(zhǎng)因子等物質(zhì),這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能,因而上述液體多采用濾過(guò)消毒以除去細(xì)菌。
目前常使用的濾器有Zeiss濾器、玻璃濾器和微孔濾器,各種濾器有其使用原理和特點(diǎn)(后詳述)。
(2)培養(yǎng)用器皿:
a)培養(yǎng)器皿:供細(xì)胞接種、生長(zhǎng)等用的器皿,可由透明度好、無(wú)毒的中性硬質(zhì)玻璃或無(wú)毒而透明光滑的特制塑料制成。
(a)玻璃培養(yǎng)器皿的優(yōu)點(diǎn)是多數(shù)細(xì)胞均可生長(zhǎng),易于清洗、消毒,可反復(fù)使用,并且透明而便于觀察;缺點(diǎn)是易碎,清洗時(shí)費(fèi)人力。
(b)塑料制培養(yǎng)器皿的優(yōu)點(diǎn)是一次性使用,廠家已消毒滅菌密封包裝,打開(kāi)即可用于細(xì)胞培養(yǎng)操作。
常用的培養(yǎng)器皿:
培養(yǎng)瓶:由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)、繁殖細(xì)胞。進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,膠塞多用于密封培養(yǎng)。國(guó)產(chǎn)培養(yǎng)瓶的規(guī)格以容量(ml)表示,如250ml、100ml、25ml等;進(jìn)口培養(yǎng)瓶則多以底面積(cm2)表示。
培養(yǎng)皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分離、處理組織或做細(xì)胞毒性、集落形成、單細(xì)胞分離、同位素?fù)饺?、?xì)胞繁殖等實(shí)驗(yàn)使用。常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有 10cm、9cm、6cm、3.5cm等。
多孔培養(yǎng)板:為塑料制品??晒┘?xì)胞克隆及細(xì)胞毒性等各種檢測(cè)實(shí)驗(yàn)使用。其優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約樣本及試劑,可同時(shí)測(cè)試大量樣本,易于進(jìn)行無(wú)菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格,常用的規(guī)格有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
各種單層生長(zhǎng)的細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中長(zhǎng)滿時(shí)可獲得的細(xì)胞數(shù),主要是取決于器皿的底表面積和細(xì)胞體積的大小。常用培養(yǎng)器皿及可獲得的細(xì)胞數(shù)(以Hela細(xì)胞為例)見(jiàn)表2。
表2 常用的培養(yǎng)器皿及可獲得的細(xì)胞數(shù)
培養(yǎng)器皿
底面(cm2)
加培養(yǎng)液量(ml)
可獲細(xì)胞量
96孔培養(yǎng)板
0.32
0.1
1×105
24孔培養(yǎng)板
2
1.0
5×105
12孔培養(yǎng)板
4.5
2.0
1×106
6孔培養(yǎng)板
9.6
2.5
2.5×106
4孔培養(yǎng)板
28
5.0
7×106
3.5cm培養(yǎng)皿
8
3.0
2.0×106
6cm培養(yǎng)皿
21
5.0
5.2×106
9cm培養(yǎng)皿
49
10.0
12.2×106
10cm培養(yǎng)皿
55
10.0
13.7×106
25cm塑料培養(yǎng)瓶
25
5.0
5×106
75cm塑料培養(yǎng)瓶
75
15~30
2×107
25ml玻璃培養(yǎng)瓶
19
4.0
3×106
100ml玻璃培養(yǎng)瓶
37.5
10.0
6×106
250ml玻璃培養(yǎng)瓶
78
15.0
7×107
2500ml旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶
700
100~250
2.0×108
b)培養(yǎng)操作有關(guān)的器皿:
○a貯液瓶:主要用于存放或配制各種培養(yǎng)用液體如培養(yǎng)液、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規(guī)格,如1000ml、500ml、250ml、 100ml、50ml、5ml等。
○b吸管:主要分為刻度吸管、無(wú)刻度吸管??潭任苤饕糜谖?、轉(zhuǎn)移液體,常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規(guī)格。無(wú)刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管,除可以作吸取、轉(zhuǎn)移液體外,彎頭尖吸管還常用于吹打、混勻及傳代細(xì)胞。
○c加樣器(移液器):用于吸取、移動(dòng)液體或滴加樣本??筛鶕?jù)需要調(diào)節(jié)量的大小,吸量準(zhǔn)確、方便。尤以微量加樣器,可保證實(shí)驗(yàn)樣品(或試劑)含量精確,重復(fù)性良好。目前,可高溫消毒的,多通道的各類移液器可供使用者選擇,能確保加樣準(zhǔn)確、快速、方便并且達(dá)到無(wú)菌要求。
c)其他用品:尚有收集細(xì)胞用的離心管,放置試劑或臨時(shí)插置吸管用的試管,裝放吸管以便消毒的玻璃或不銹鋼容器,用于存放小件培養(yǎng)物品便于高壓消毒的鋁制飯盒或貯槽,套于吸管頂部的橡膠吸頭,封閉各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細(xì)胞用的安瓿或凍存管、不同規(guī)格的注射器、燒杯和量筒以及漏斗,超凈工作臺(tái)使用的酒精燈,供實(shí)驗(yàn)人員操作前清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型噴壺等。
(3)器械:主要用于解剖、取材、剪切組織及操作時(shí)持取物件。常用的有:手術(shù)刀或解剖刀、手術(shù)剪或解剖剪(彎剪及直剪),用于解剖動(dòng)物、分離及切剪組織,制備原代培養(yǎng)的材料;眼科虹膜小剪(彎剪或直剪),用于將組織材料剪成小塊;血管鉗及組織鑷、眼科鑷(彎、直),用于持取無(wú)菌物品(如小蓋玻片)夾持組織等;口腔科探針或代用品,用以放置原代培養(yǎng)之組織小塊。
02
特殊設(shè)備
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室除了應(yīng)配備上述的常用基本設(shè)備以外,如有條件,可添置一些特殊或先進(jìn)的設(shè)備儀器,以便更有效、更精確、更深入地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室工作。例如:
(1)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀——可用于進(jìn)行免疫學(xué)測(cè)定及細(xì)胞毒性、藥物敏感性檢測(cè)等。
(2) 超低溫冰箱(-85℃)——便于儲(chǔ)存某些試劑及標(biāo)本。
(3)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器——用于某些特殊細(xì)胞或需要收獲大量細(xì)胞的培養(yǎng)。
(4) 熒光顯微鏡——進(jìn)行熒光染色樣本的觀察。
(5) 流式細(xì)胞儀——可更精確及快速檢測(cè)細(xì)胞。
(6)用于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)條件的各種儀器,例如專門(mén)為快速分析細(xì)胞培養(yǎng)基中主要或關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)成分、代謝產(chǎn)物及氣體含量設(shè)計(jì)的多功能細(xì)胞培養(yǎng)分析儀、手提式CO2濃度測(cè)定儀等。