基礎(chǔ)科研和高通量藥物篩選常用檢測(cè)體系優(yōu)化，pH值是其中一個(gè)至關(guān)重要的影響因素。常見(jiàn)的生物酶活性，蛋白結(jié)構(gòu)，結(jié)合動(dòng)力學(xué)等生化分子反應(yīng)均受反應(yīng)體系的p H值影響。 因此，pH的精確測(cè)定對(duì)于體系優(yōu)化等日常實(shí)驗(yàn)尤為重要。然而，常用的傳統(tǒng)電極測(cè)定法，因其操作過(guò)程繁瑣（包括校正，沖洗，測(cè)定，沖洗等），大大限制了高通量樣品pH測(cè)定過(guò)程。
對(duì)此，近期德國(guó)BMG公司利用其專(zhuān)利的超快速全光譜檢測(cè)酶標(biāo)儀（SPECTROstar Nano）和美國(guó)Hudson Robotics Inc公司全自動(dòng)移液工作站（SOLO自動(dòng)移液器，Micro 10X分液器以及PlateCrane EX Robotic Arm高通量機(jī)械）開(kāi)發(fā)出高通量自動(dòng)化pH檢測(cè)方案（圖1）。
該方案利用pH指示劑溴百里香酚藍(lán)在不同酸堿環(huán)境下有不同吸收光譜這一特性進(jìn)行精確定量。溴百里香酚藍(lán)有兩種存在形式：基礎(chǔ)形式在620nm附近有最大吸收峰，中性形式在400-430nm有最大吸收峰。以往的方案中，利用基礎(chǔ)形式的溴百里香酚藍(lán)測(cè)定pH的比較常見(jiàn)。然而這種檢測(cè)單一最大吸收波峰的方案，非常容易受溶液各種因素的影響，任何微小體積變化，溶液成份變化，都會(huì)影響最大吸收波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果。本次介紹的新方案利用中性形式的溴百里香酚藍(lán)，通過(guò)測(cè)定其在不同pH溶液中的吸收光譜信息（圖2），快速準(zhǔn)確測(cè)定溶液pH值（圖3）。
圖2，不同pH溶液中溴百里香酚藍(lán)吸收光譜
圖3，不同pH溶液，pH測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。橫坐標(biāo)為不同溶液的pH值，縱坐標(biāo)為溴百里香酚藍(lán)吸收光譜范圍內(nèi)最大值減去背景值。數(shù)據(jù)資料顯示，通過(guò)該方案測(cè)定的pH值，比測(cè)定基礎(chǔ)形式的溴百里香酚藍(lán)單一最大吸收波長(zhǎng)更準(zhǔn)確跟穩(wěn)定。
這種新的pH定量方案，不僅檢測(cè)數(shù)據(jù)精確穩(wěn)定，同時(shí)結(jié)合自動(dòng)化的Hudson Robotic整體液體處理方案及BMG SPECTROstarNano超超快速免選波長(zhǎng)的檢測(cè)方案，為小體積高通量pH精準(zhǔn)定量提供了最理想的實(shí)驗(yàn)方案。
對(duì)此，近期德國(guó)BMG公司利用其專(zhuān)利的超快速全光譜檢測(cè)酶標(biāo)儀（SPECTROstar Nano）和美國(guó)Hudson Robotics Inc公司全自動(dòng)移液工作站（SOLO自動(dòng)移液器，Micro 10X分液器以及PlateCrane EX Robotic Arm高通量機(jī)械）開(kāi)發(fā)出高通量自動(dòng)化pH檢測(cè)方案（圖1）。
圖1，高通量自動(dòng)化pH精準(zhǔn)定量解決方案
該方案利用pH指示劑溴百里香酚藍(lán)在不同酸堿環(huán)境下有不同吸收光譜這一特性進(jìn)行精確定量。溴百里香酚藍(lán)有兩種存在形式：基礎(chǔ)形式在620nm附近有最大吸收峰，中性形式在400-430nm有最大吸收峰。以往的方案中，利用基礎(chǔ)形式的溴百里香酚藍(lán)測(cè)定pH的比較常見(jiàn)。然而這種檢測(cè)單一最大吸收波峰的方案，非常容易受溶液各種因素的影響，任何微小體積變化，溶液成份變化，都會(huì)影響最大吸收波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果。本次介紹的新方案利用中性形式的溴百里香酚藍(lán)，通過(guò)測(cè)定其在不同pH溶液中的吸收光譜信息（圖2），快速準(zhǔn)確測(cè)定溶液pH值（圖3）。
圖2，不同pH溶液中溴百里香酚藍(lán)吸收光譜圖3，不同pH溶液，pH測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。橫坐標(biāo)為不同溶液的pH值，縱坐標(biāo)為溴百里香酚藍(lán)吸收光譜范圍內(nèi)最大值減去背景值。數(shù)據(jù)資料顯示，通過(guò)該方案測(cè)定的pH值，比測(cè)定基礎(chǔ)形式的溴百里香酚藍(lán)單一最大吸收波長(zhǎng)更準(zhǔn)確跟穩(wěn)定。這種新的pH定量方案，不僅檢測(cè)數(shù)據(jù)精確穩(wěn)定，同時(shí)結(jié)合自動(dòng)化的Hudson Robotic整體液體處理方案及BMG SPECTROstarNano超超快速免選波長(zhǎng)的檢測(cè)方案，為小體積高通量pH精準(zhǔn)定量提供了最理想的實(shí)驗(yàn)方案。
