小代君說

目前絕大部分細胞實驗室使用超凈工作臺實現(xiàn)無菌操作，具有操作簡單、安裝方便、占用空間小且凈化效果很好。小代君為您介紹兩種主要超凈工作臺-側(cè)流式（垂直式）和外流式（水平層流式）。工作原理一般是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾，由離心風機壓入靜壓箱，再經(jīng)高效空氣過濾器精濾，由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風速通過無菌區(qū)，從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環(huán)境。 

（1） 側(cè)流式工作臺：空氣凈化后的氣流由左或右側(cè)通過工作臺面流向?qū)?cè)，也有從上向下或從下向上流向?qū)?cè)，形成氣流屏障保持工作區(qū)無菌，工作臺結(jié)構(gòu)為封閉式； 

（2） 外流式工作臺：凈化后的空氣面向操作者流動，因而外方氣流不致混入操作，工作臺結(jié)構(gòu)為開放式，但進行有害物質(zhì)實驗操作對操作者不利。超凈工作臺應需要定期請有關部門檢查潔凈度，符合要求的超凈工作臺其潔凈度應達到100級，用塵埃粒子計數(shù)儀檢測粒徑≤5μm的塵埃粒子數(shù)量不應超過3.5個/L；空氣流量應控制在0.75-1.0m3/s；細菌菌落數(shù)平均<1個，根據(jù)無菌狀況必要時需要置換過濾器。 

?倒置式顯微鏡是細胞培養(yǎng)實驗室日常工作常規(guī)必備設備，主要用于日常了解細胞的生長情況并觀察有無污染發(fā)生。如資金允許，建議選用配置有照相系統(tǒng)的高品質(zhì)相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統(tǒng)或縮時電影拍攝裝置等，可隨時拍攝并記錄細胞生長情況。 

體外培養(yǎng)的細胞和體內(nèi)細胞一樣，需要在恒定的溫度下生存，一般最適生長溫度為37℃，溫差變化不應超過±0.5℃。溫度升高2℃時，變不利于細胞生存，溫度達到40℃以上細胞將很快死亡。因此，可精確控溫的恒溫培養(yǎng)箱、CO2培養(yǎng)箱是最佳選擇。 

（1） 恒溫培養(yǎng)箱：應選隔水式或晶體管式自控溫培養(yǎng)箱，此類培養(yǎng)箱靈敏度高，溫度控制較穩(wěn)定。一般的恒溫培養(yǎng)箱價格較便宜，其缺點是只宜于作密閉式培養(yǎng)。 

（2） CO2培養(yǎng)箱：目前多數(shù)的細胞培養(yǎng)室已廣泛使用。CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點是能夠提供進行細胞培養(yǎng)時所需要的一定量的CO2（常用濃度為5％），易于穩(wěn)定培養(yǎng)液pH，適用于開放或半開放培養(yǎng)。使用培養(yǎng)瓶時，為使培養(yǎng)瓶內(nèi)與外界保持通氣狀態(tài)，可將瓶蓋略微旋松，為避免細胞被污染，使用這種培養(yǎng)方式時，培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須保持清潔，需定期用紫外線照射或酒精消毒，同時培養(yǎng)箱內(nèi)應放置盛有無菌蒸餾水的水槽，防止培養(yǎng)液蒸發(fā)，保持箱內(nèi)相對濕度在100%。 

（3） 細胞培養(yǎng)耗材：培養(yǎng)細胞的器皿可用培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶。

?用于細胞培養(yǎng)的一些器械、器皿必須烘干后才能使用，玻璃器皿等須干熱消毒。干熱消毒時，烘箱內(nèi)溫度一般要達到160℃以上，通常使用鼓風式烘箱。其優(yōu)點是溫度均勻、效果較好，缺點是升溫過程較慢。升溫時不能先升溫后鼓風而應鼓風與升溫同時開始，至100℃時，停止鼓風。需注意避免包裹器皿的紙或棉花燒焦，燒焦的碎屑可影響細胞的生長。消毒后不能立即打開箱門，以免驟冷導致玻璃器皿破裂，應等溫度自然下降至100℃以下后可開門。 

?細胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高，細胞培養(yǎng)、細胞培養(yǎng)相關液體的配制用水以及清洗細胞培養(yǎng)器皿用水都必須事先經(jīng)過嚴格的純化處理。目前有多種純化方法相結(jié)合，可使普通水純化為純水和超純水的純水裝置使用非常靈活方便，可掛壁式、臺式、可配儲水箱、也可直接用分液槍、還可根據(jù)各類實驗用水要求選擇配置殺菌功能，有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等，更有可有效去除掉熱源、內(nèi)毒素的超濾型純水裝置。

細胞培養(yǎng)實驗室必備設備，應專用，不得存放易揮發(fā)、易燃燒等對細胞有害的物質(zhì)，且應保持清潔。一般包括普通冰箱、低溫冰箱和超低溫冰箱。 

普通冰箱：儲存培養(yǎng)液、生理鹽水、Hanks液試劑等培養(yǎng)用的物品，可短期保存組織樣本。

-20℃低溫冰箱、超低溫冰箱：用于儲存需要冷凍以保持生物活性以及需長時期存放的制劑，如酶、血清等。 

?儲存器常用的液氮容器，根據(jù)使用需要分為不同類型和規(guī)格。選擇液氮容器時需要考慮三個因素：容積大小、取放使用方便、液氮揮發(fā)量。液氮容器的大小一般在25-500L，可以儲存1ml的凍存管250-15000個左右。液氮溫度最低文帝可達-196℃，使用時應注意避免凍傷。由于液氮易揮發(fā)，需注意觀察剩余液氮量，及時補充，避免液氮不足使細胞受損或死亡。目前有許多智能型細胞冷凍儲存器可供選擇，可配置有電子控制器的液氮儲存器，實現(xiàn)凍存自動化；并可監(jiān)測液氮水平和樣品溫度，確保樣品溫度始終處于設定溫度點；可配置報警系統(tǒng)，設置液氮液面、溫度、電池、電壓、電源等失常情況下報警；同時具備熱氣體旁路系統(tǒng)，防止高于-130℃的暖空氣進入液氮罐，從而更有效地保護樣品，防止容器內(nèi)升溫。另外，可選擇液氮供應罐通過連接管給儲存罐補充液氮，保證樣品安全。 

細胞培養(yǎng)時，通常使用離心機制備細胞懸液、調(diào)整細胞密度、洗滌和收集細胞。一般常規(guī)配置4000rpm臺式離心機；若要做細胞沉降，需要使用80-100G離心力，因為離心力過大會損傷細胞。根據(jù)不同要求，有大容量、可調(diào)溫度離心機、高速離心機和低溫冷凍離心機等更多功能離心機可選擇。

常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精確度一般為0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根據(jù)取樣量量和精度要求選擇合適的天平：取樣量大于100mg宜選用精確度0.1mg的天平；取樣量100-10mg，選用精確度0.01mg的天平；取樣量10mg宜選用精確度0.001mg的天平。天平需要定期校準，可選擇有自動校準功能的天平，方便維護。天平使用需要注意清潔，避免腐蝕性粉末、液體直接接觸稱量臺。