樣本處理環(huán)節(jié)抽提核酸和檢測環(huán)節(jié)擴增產(chǎn)物泄露均會導(dǎo)致核酸污染,飛濺的擴增產(chǎn)物會形成氣溶膠漂浮在空氣中,粘附到物體表面及檢測人員身體 上,隨著人員及物料流動而污染整個實驗室。
實驗室一旦發(fā)生核酸污染極難清除,會造成實驗室短期內(nèi)無法開展工作,因此防范和清除核酸污染是分子檢測實驗室的工作重點。
目前的核酸檢測均采用閉管檢測以防止開蓋形成氣溶膠,同時采取嚴(yán)格的物理隔絕法,檢測依次分為試劑準(zhǔn)備區(qū)-樣本準(zhǔn)備區(qū)-擴增區(qū)-產(chǎn)物檢測區(qū),且逐級壓,這些策略都最大程度地防止了氣溶膠污染,但核酸污染事故依然時有發(fā)生。由于核酸檢測步驟較多,且多個環(huán)節(jié)樣本直接暴露于空氣中,任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)一點小紕漏就容易導(dǎo)致整個實驗室的污染。即使嚴(yán)格按照規(guī)程操作,核酸污染依然無法徹底避免。
核酸污染主要體現(xiàn)在樣本核酸或擴增產(chǎn)物在臺面、設(shè)備、檢測人員表面的核酸殘留,以及擴增產(chǎn)物形成的氣溶膠。氣溶膠由于顆粒較小,若不做處理可長期漂浮在空氣中持續(xù)影響實驗室的檢測。
核酸實驗室污染的主要原因有:標(biāo)本污染; 試劑污染; 產(chǎn)物污染; 設(shè)備污染; 其他污染。
其解決措施 為:標(biāo)本污染:重新采樣進行檢測,評估標(biāo)本前處理環(huán)節(jié);
試劑污染:更換新的試劑重新檢測評估;
設(shè)備污染:設(shè)備整體消毒清潔、維護;
產(chǎn)物污染:全面清潔消毒實驗室、儀器設(shè)備所有實驗有關(guān)用品。
發(fā)現(xiàn)污染,檢測工作應(yīng)立即停止,直到確認(rèn)消除污染后才能重新開始檢測。首先,要查找污染源和明確污染范圍。然后,根據(jù)污染源和污染范圍采取有效的去污染措施,結(jié)合各種不同方法以達到最佳效果。
實驗室污染的處理:
1.標(biāo)本污染生物安全柜的操作臺造成局限污染時:
立即用吸水紙覆蓋,并使用0.55%含氯消毒劑進行噴灑消毒。消毒液需要現(xiàn)用現(xiàn)配,24小時內(nèi)使用。
2.標(biāo)本傾覆造成實驗室污染時:
保持實驗室空間密閉,避免污染物擴散。立即使用潤濕有0.55%含氯消毒劑的毛巾覆蓋污染區(qū)。必要時(如大量溢撒時)可用過氧化氫加熱熏蒸實驗室,劑量為2g/m ,熏蒸過夜;或20g/L過氧乙酸消毒液用氣溶膠噴霧器噴霧,用量8ml/m ,作用1-2小時;
3.清理污染物時:
嚴(yán)格遵循活病毒生物安全操作要求,采用壓力蒸汽滅菌處理,并進行實驗室換氣等,防止次生危害。