小代君說(shuō)

1、生物學(xué)特性：

新型冠狀病毒屬于β屬的冠狀病毒，有包膜，顆粒呈圓形或橢圓形，直徑60～140nm。具有5 個(gè)必需基因，分別針對(duì)核蛋白（N）、病毒包膜（E）、基質(zhì)蛋白（M）和刺突蛋白（S）4 種結(jié)構(gòu)蛋白及RNA 依賴(lài)性的RNA 聚合酶（RdRp）。核蛋白（N）包裹RNA 基因組構(gòu)成核衣殼，外面圍繞著病毒包膜（E），病毒包膜包埋有基質(zhì)蛋白（M）和刺突蛋白（S）等蛋白。刺突蛋白通過(guò)結(jié)合血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE-2）進(jìn)入細(xì)胞。體外分離培養(yǎng)時(shí)，新型冠狀病毒96 個(gè)小時(shí)左右即可在人呼吸道上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)，而在Vero E6 和Huh-7 細(xì)胞系中分離培養(yǎng)約需4～6天。冠狀病毒對(duì)紫外線(xiàn)和熱敏感，56℃ 30 分鐘、乙醚、75%乙醇、含氯消毒劑、過(guò)氧乙酸和氯仿等脂溶劑均可有效滅活病毒，氯己定不能有效滅活病毒。

2、流行病學(xué)特性：
傳染源主要是新型冠狀病毒感染的患者，無(wú)癥狀感染者也可能成為傳染源，在潛伏期即有傳染性，發(fā)病后5天內(nèi)傳染性較強(qiáng)，經(jīng)呼吸道飛沫和密切接觸傳播是主要的傳播途徑。在相對(duì)封閉的環(huán)境中長(zhǎng)時(shí)間暴露于高濃度氣溶膠情況下存在經(jīng)氣溶膠傳播的可能，接觸病毒污染的物品也可造成感染。由于在糞便及尿中可分離到新型冠狀病毒，應(yīng)注意糞便及尿?qū)Νh(huán)境污染造成氣溶膠或接觸傳播。人群普遍易感。感染后或接種新型冠狀病毒疫苗后可獲得一定的免疫力，但持續(xù)時(shí)間尚不明確。

3、預(yù)防、診斷和治療：

新冠疫苗正在研制和試驗(yàn)中。診斷主要根據(jù)流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查。尚無(wú)特效藥物，主要有抗病毒、免疫、糖皮質(zhì)激素等對(duì)癥支持治療。

4、實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)及其危險(xiǎn)性與預(yù)防措施：

本實(shí)驗(yàn)室主要從事未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料的血清學(xué)檢測(cè)、核酸檢測(cè)、生化分析等操作，應(yīng)在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展，盡可能在生物安全柜中進(jìn)行，個(gè)人采用三級(jí)生物安全防護(hù)。新型冠狀病毒暫按照病原微生物危害程度分類(lèi)中第二類(lèi)病原微生物進(jìn)行管理。

5、工作人員素質(zhì)：

具備相應(yīng)工作資質(zhì)、崗位能力認(rèn)可。接受專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，掌握相應(yīng)技術(shù)規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全防護(hù)知識(shí)和實(shí)際操作技能，并考核合格。

1、新冠病毒核酸檢測(cè)

（1）呼吸道標(biāo)本（鼻咽拭子、咳痰、抽吸痰、BALF、PSB、組織等）含有病毒，傳染性較強(qiáng)，所采集標(biāo)本需放置于三層包裝盒內(nèi)送檢。

（2）標(biāo)本采集人員必須通過(guò)相關(guān)部門(mén)舉辦的生物安全培訓(xùn)，并考核合格。標(biāo)本采集人員應(yīng)按三級(jí)防護(hù)采集標(biāo)本。

（3）采集標(biāo)本后用75%乙醇噴灑標(biāo)本采集管外部，立即放入標(biāo)有“生物危險(xiǎn)”密封袋中并封嚴(yán)封口；再用75%乙醇噴灑密封袋外部，然后放入標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)容器，并對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)容器進(jìn)行外部消毒，及時(shí)送檢。標(biāo)本運(yùn)送人員進(jìn)行二級(jí)防護(hù)并隨身攜帶75%乙醇，以便發(fā)生意外時(shí)能及時(shí)處理，標(biāo)本運(yùn)送時(shí)宜派兩人同行，條件允許時(shí)應(yīng)配備標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)監(jiān)控裝置。

（4）標(biāo)本接收人員按二級(jí)防護(hù)佩戴防護(hù)設(shè)備。接收標(biāo)本前應(yīng)檢查標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)容器外包裝有無(wú)破損，打開(kāi)容器前用75%乙醇對(duì)標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)容器進(jìn)行噴灑或擦拭消毒。將標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)容器放入生物安全柜，在安全柜中打開(kāi)標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)容器并立即用75%乙醇噴灑或擦拭消毒，取出標(biāo)本密封袋后，對(duì)密封袋用75%乙醇噴灑或擦拭消毒。

（5）標(biāo)本前處理及核酸提取操作的工作人員應(yīng)進(jìn)行三級(jí)防護(hù)。標(biāo)本應(yīng)滅活后再進(jìn)行下一步處理。標(biāo)本前處理應(yīng)在生物安全柜中操作，取出標(biāo)本后用75%乙醇對(duì)標(biāo)本外部進(jìn)行噴灑或擦拭消毒。標(biāo)本進(jìn)行操作結(jié)束后，第一層手套用75%乙醇消毒后棄去，更換新外層手套。

（6）核酸擴(kuò)增建議按三級(jí)防護(hù)要求進(jìn)行防護(hù)。與標(biāo)本接觸過(guò)的醫(yī)療廢物，如tip頭、采樣管、小離心管（如EP管）等應(yīng)用0.55%～1%含氯消毒液處理，用三層醫(yī)療廢物包裝袋（標(biāo)有“感染性廢物”）裝好扎緊后轉(zhuǎn)出實(shí)驗(yàn)區(qū)，經(jīng)高壓蒸汽滅菌后按醫(yī)療廢物處理。防護(hù)服、鞋套、手套、口罩用75%乙醇消毒后收集于三層醫(yī)療廢物包裝袋（標(biāo)有“感染性廢物”）中，經(jīng)高壓滅菌后按醫(yī)療廢物處理。

2、臨床常規(guī)檢驗(yàn)

（1）部分患者，尤其是危重型患者，會(huì)有病毒血癥。病毒血癥時(shí)的血液標(biāo)本，有傳染性。糞便、尿液標(biāo)本已證實(shí)有病毒分離，按有傳染性處理。胸腔積液少見(jiàn)，尚未證實(shí)胸腔積液標(biāo)本的傳染性，建議按有傳染性處理。尚無(wú)病毒載量信息的標(biāo)本：胸腔積液之外的其他正常無(wú)菌體液（腦脊液、心包積液、腹腔積液、后穹隆穿刺液、關(guān)節(jié)液）、腹膜透出液、精液、女性生殖道分泌物等，建議目前按有傳染性處理。

（2）血液標(biāo)本檢驗(yàn)：如果操作過(guò)程不必打開(kāi)試管塞（比如真空采血管的帽），則二級(jí)生物安全防護(hù)。如果操作過(guò)程須打開(kāi)試管塞，或可能產(chǎn)生氣溶膠，或可能接觸標(biāo)本本身，則三級(jí)生物安全防護(hù)。盡可能避免打開(kāi)試管塞，打開(kāi)則輕柔緩慢，和操作者面部保持距離。盡可能縮短打開(kāi)的持續(xù)時(shí)間。盡可能避免產(chǎn)生氣溶膠。如果可以，噴霧消毒。操作盡可能在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。如果是打開(kāi)試管塞、或有可能產(chǎn)生氣溶膠的操作，則必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。打開(kāi)試管塞后，如果可以，則消毒后棄去蓋子。血液樣本在離心前一定要認(rèn)真檢測(cè)試管有無(wú)破損，試管塞有無(wú)蓋緊等。離心機(jī)離心停止10分鐘以上，開(kāi)離心機(jī)蓋噴霧消毒。手工檢測(cè)的項(xiàng)目要在生物安全柜中進(jìn)行。自動(dòng)血細(xì)胞分析儀、自動(dòng)凝血分析儀、自動(dòng)化學(xué)檢測(cè)儀、自動(dòng)免疫學(xué)檢測(cè)儀等檢測(cè)新冠標(biāo)本的過(guò)程中，有產(chǎn)生氣溶膠的風(fēng)險(xiǎn)。此時(shí)產(chǎn)生噴濺、氣溶膠的時(shí)間、劇烈程度不確定，無(wú)法評(píng)估。確診患者標(biāo)本，建議三級(jí)生物安全防護(hù)。疑似患者標(biāo)本，可以二級(jí)生物安全防護(hù)，或在此基礎(chǔ)上適度加強(qiáng)。

（3）尿液、糞便標(biāo)本檢驗(yàn)：如果是打開(kāi)蓋子、或有可能產(chǎn)生氣溶膠的操作，則必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。確診患者標(biāo)本，建議三級(jí)生物安全防護(hù)。疑似患者標(biāo)本，可以二級(jí)生物安全防護(hù)，或在此基礎(chǔ)上適度加強(qiáng)。

（4）微生物標(biāo)本檢驗(yàn)：呼吸道分泌物涂片須在生物安全柜內(nèi)涂布，涂布后須紫外照射30min。標(biāo)本培養(yǎng)相關(guān)操作（液化、振蕩、涂布、劃線(xiàn)等）須在安全柜內(nèi)完成?？磁囵B(yǎng)皿生長(zhǎng)，建議在安全柜內(nèi)進(jìn)行。須三級(jí)生物安全防護(hù)。

（5）檢驗(yàn)后：標(biāo)本密封。血液等標(biāo)本應(yīng)生物安全柜中重新加蓋塞子（新的），按規(guī)定保存。如果直接高壓蒸汽滅菌，須塑料薄膜覆蓋。高壓滅菌前，如果保存時(shí)間較長(zhǎng)，須噴灑消毒液后保存。標(biāo)本出科符合生物安全原則、符合感染管理規(guī)范。

（6）生物安全操作失誤或意外的處理

a、新冠標(biāo)本污染生物安全柜的操作臺(tái)造成局限污染：使用有效氯含量為5500mg/L消毒液消毒污染區(qū)，作用30min以上；消毒液需要現(xiàn)用現(xiàn)配，24h內(nèi)使用。消毒結(jié)束后立即用清水擦拭，避免腐蝕臺(tái)面。

b、新冠標(biāo)本造成實(shí)驗(yàn)室污染：保持實(shí)驗(yàn)室空間密閉，避免不相關(guān)人員出入，避免污染物擴(kuò)散。使用5500mg/L有效氯消毒液的毛巾覆蓋污染區(qū)，消毒30min以上。必要時(shí)（如大量溢灑時(shí)）可用過(guò)氧乙酸加熱熏蒸實(shí)驗(yàn)室，劑量為2g/m3，熏蒸過(guò)夜；或20g/L過(guò)氧乙酸消毒液用氣溶膠噴霧器噴霧，用量8ml/m3，作用1～2h。熏蒸時(shí)室內(nèi)濕度60%～80%。

c、廢棄污染物清理嚴(yán)格遵循活病毒生物安全操作要求，采用高壓蒸汽滅菌處理，并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室換氣等，防止次生危害。

（一） 樣本運(yùn)輸過(guò)程存在風(fēng)險(xiǎn)：

1. 樣本在運(yùn)輸過(guò)程中，可能會(huì)因試管塞子脫落或破碎造成污染

預(yù)防措施：標(biāo)本采集后對(duì)標(biāo)本采集管進(jìn)行條碼粘貼，使用三層包裝，專(zhuān)人用專(zhuān)用標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)箱運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。

① 所有標(biāo)本應(yīng)放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有墊圈、耐冷凍的樣本采樣管里，擰緊管蓋；

② 樣本采樣管三層包裝后放入專(zhuān)用樣本運(yùn)送箱，用物品填塞空隙，以避免標(biāo)本移動(dòng)。

2. 運(yùn)輸人員佩戴一次性手套接觸樣本后再按電梯可能造成污染；

預(yù)防措施：雙人送檢，一人負(fù)責(zé)按電梯或使用專(zhuān)用電梯。

3.實(shí)驗(yàn)室樣本運(yùn)輸過(guò)程遠(yuǎn)，可能路遇病人較多，有污染風(fēng)險(xiǎn)。

預(yù)防措施：運(yùn)送樣本應(yīng)避免經(jīng)過(guò)患者較多電梯或走消防樓梯，當(dāng)電梯中人員較多時(shí)應(yīng)等待人員少或無(wú)人時(shí)再乘坐電梯。

（二）樣本接收管理及存在風(fēng)險(xiǎn)

1.樣本信息登記錯(cuò)誤，患者信息泄露。

預(yù)防措施：新型冠狀病毒毒株和相關(guān)樣本應(yīng)當(dāng)由專(zhuān)人管理，準(zhǔn)確記錄樣本的來(lái)源、種類(lèi)、數(shù)量、編號(hào)登記，嚴(yán)防發(fā)生誤用、惡意使用、被盜、被搶、丟失、泄露等事件。

2.樣本接收時(shí)，病毒未滅活，存在感染風(fēng)險(xiǎn)。

預(yù)防措施：樣本接收以后，在生物安全柜中完成以下步驟：每打開(kāi)一層包裝前都要周身噴涂75%乙醇，樣本管取出后，立刻對(duì)樣本管周身噴涂75%乙醇，尤其對(duì)開(kāi)口處進(jìn)行噴涂。隨后樣本在生物安全柜內(nèi)的56℃水浴箱中滅活30min，樣本拿出后繼續(xù)周身噴涂75%乙醇，再進(jìn)行后續(xù)的操作。整個(gè)樣本前處理中，時(shí)刻要對(duì)樣本周?chē)h(huán)境進(jìn)行75%乙醇噴灑，保持局部清潔，完成操作后開(kāi)紫外燈照射30min。

（三）樣本核酸提取

1.滅活后樣本依舊具有感染風(fēng)險(xiǎn)，在生物安全柜提取病毒核酸的過(guò)程，也可能存在病毒的泄露和污染。

預(yù)防措施：從事新型冠狀病毒檢測(cè)標(biāo)本采集的技術(shù)人員應(yīng)經(jīng)過(guò)生物安全培訓(xùn)（培訓(xùn)合格）、具備相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)技能、通過(guò)三級(jí)防護(hù)的穿脫培訓(xùn)和考核。實(shí)驗(yàn)人員專(zhuān)業(yè)防護(hù)裝備要求：N95口罩、護(hù)目鏡、防護(hù)服、乳膠手套、防水靴套。并嚴(yán)格按照SOP相關(guān)要求對(duì)環(huán)境、操作臺(tái)面、儀器及廢棄物進(jìn)行消毒。

2.樣本在進(jìn)行自動(dòng)核酸提取時(shí)，可能產(chǎn)生氣溶膠污染。

預(yù)防措施：樣品在生物安全柜中打開(kāi)，在生物安全柜內(nèi)開(kāi)蓋。將天隆自動(dòng)核酸提取儀放到生物安全柜內(nèi)，樣本加入核酸提取試劑后放置10分鐘，進(jìn)一步滅活病毒后再放入核酸提取儀進(jìn)行核酸提取。

3.標(biāo)本在處理過(guò)程中可能出現(xiàn)溢灑。

預(yù)防措施：準(zhǔn)備好消毒劑。嚴(yán)格執(zhí)行SOP。新型冠狀病毒毒株或其他潛在感染性材料污染生物安全柜的操作臺(tái)造成局限污染：使用有效氯含量為0.55%～1%消毒液，消毒液需要現(xiàn)用現(xiàn)配，24小時(shí)內(nèi)使用。

4.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中離心管破裂。 

預(yù)防措施：保持實(shí)驗(yàn)室空間密閉，避免不相關(guān)人員出入，避免污染物擴(kuò)散。使用5500mg/L有效氯消毒液的毛巾覆蓋污染區(qū)，消毒30min以上。必要時(shí)（如大量溢灑時(shí)）可用過(guò)氧乙酸加熱熏蒸實(shí)驗(yàn)室，劑量為2g/m3，熏蒸過(guò)夜；或20g/L過(guò)氧乙酸消毒液用氣溶膠噴霧器噴霧，用量8ml/m3，作用1～2h。熏蒸時(shí)室內(nèi)濕度60%～80%。

（四）實(shí)驗(yàn)廢棄物污染實(shí)驗(yàn)室外部環(huán)境 

預(yù)防措施：實(shí)驗(yàn)室制定廢棄物處置程序文件及污物、污水處理操作程序。清理污染物嚴(yán)格遵循活病毒生物安全操作要求，采用壓力蒸汽滅菌鍋121℃15分鐘處理，并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室開(kāi)窗換氣等，防止次生危害。實(shí)驗(yàn)室操作人員進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格按照三級(jí)生物防護(hù)規(guī)程。