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技術(shù)導(dǎo)航 | 實(shí)驗(yàn)室消毒、滅菌基礎(chǔ)知識(shí)及其影響因素匯總

   2022-05-30 現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室裝備網(wǎng)1052
核心提示:清潔、消毒、滅菌是預(yù)防和控制微生物實(shí)驗(yàn)室污染的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。

小代君說

導(dǎo)語

 

清潔、消毒、滅菌是預(yù)防和控制微生物實(shí)驗(yàn)室污染的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。它包括實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外環(huán)境的清潔、消毒;檢測(cè)用具、培養(yǎng)基等的消毒、滅菌。

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一、概念

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(一)消毒

是指殺滅或清除傳播媒介上的病原微生物,使之達(dá)到無害化的處理。根據(jù)有無已知的傳染源可分預(yù)防性消毒和疫源性消毒;根據(jù)消毒的時(shí)間可分為隨時(shí)消毒和終末消毒。


(二)滅菌

是指殺滅或清除傳播媒介上的所有微生物(包括芽胞),使之達(dá)到無菌程度。經(jīng)過滅菌的物品稱“無菌物品”。

 

消毒與滅菌是兩個(gè)不同的要領(lǐng)。滅菌可包括消毒,而消毒卻不能代替滅菌。消毒通常用于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)環(huán)境、人員手部等,滅菌通常用于檢測(cè)用具、檢測(cè)試劑等。

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二、消毒、滅菌的原則

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(一)明確消毒的主要對(duì)象

應(yīng)具體分析引起污染的途徑、涉及的媒介物及病原微生物的種類,有針對(duì)性地使用消毒劑。

 

(二)采取適當(dāng)?shù)南痉椒?/strong>

根據(jù)消毒對(duì)象選擇簡(jiǎn)便、有效、不損壞物品、來源豐富、價(jià)格適中的消毒方法。

 

(三)控制影響消毒效果的因素

許多因素會(huì)影響消毒劑的作用,而且各種消毒劑對(duì)這些因素的敏感性差異很大。

1.微生物的種類

不同類型的病原微生物對(duì)消毒劑抵抗力不同,因此,進(jìn)行消毒時(shí)必須區(qū)別對(duì)待。

(1)細(xì)菌繁殖體 易被消毒劑消滅,一般革藍(lán)氏陽性細(xì)菌對(duì)消毒劑較敏感,革藍(lán)氏陰性桿菌則常有較強(qiáng)的抵抗力。繁殖體對(duì)熱敏感,消毒方法以熱力消毒為主。

(2)細(xì)菌芽胞 芽胞對(duì)消毒因子耐力最強(qiáng),殺滅細(xì)菌芽胞最可靠的方法是熱力滅菌,電離輻射和環(huán)氧乙烷熏蒸法。在化學(xué)消毒劑中,戊二醛、過氧乙酸能殺滅芽胞,但可靠性不如熱力滅菌法。

(3)病毒 對(duì)消毒因子的耐力因種類不同而有很大差異,親水病毒的耐力較親脂病毒強(qiáng)。

(4)真菌 對(duì)干燥、日光、紫外線以及多數(shù)化學(xué)藥物耐力較強(qiáng),但不耐熱(60℃1小時(shí)殺滅)。

2.微生物的數(shù)量 

污染的微生物數(shù)量越多需要消毒的時(shí)間就越長(zhǎng),劑量越大。

3.有機(jī)物的存在

①有機(jī)物在微生物的表面形成保護(hù)層妨礙消毒劑與微生物的接觸或延遲消毒劑的作用,以致于微生物逐漸產(chǎn)生對(duì)藥物的適應(yīng)性。

②有機(jī)物和消毒劑作用,形成溶解度比原來更低或殺菌作用比原來更弱的化合物。

③一部分消毒劑與有機(jī)物發(fā)生了作用,則對(duì)微生物的作用濃度降低。

④有機(jī)物可中和一部分消毒劑。消毒劑中重金屬類、表面活化劑等受有機(jī)物影響較大,對(duì)戊二醛影響較小。

4.溫度 

隨著溫度的升高,殺菌作用增強(qiáng),但溫度的變化對(duì)各種消毒劑影響不同。如甲醛、戊二醛、環(huán)氧乙烷的濕度升高1倍時(shí),殺菌效果可增加10倍。而酚類和酒精受溫度影響小。

5.PH值 

從兩方面影響殺菌作用。①對(duì)消毒劑的作用:改變其溶解度和分子結(jié)構(gòu)。②pH過高或過低對(duì)微生物的生長(zhǎng)均有影響。在酸性條件下,細(xì)菌表面負(fù)電荷減少,陰離子型消毒劑殺菌效果好。在堿性條件下,細(xì)菌表面負(fù)電荷增多,有利于陽離子型消毒劑發(fā)揮作用。

6.處理劑量與監(jiān)測(cè)

 保證消毒、滅菌處理的劑量,加強(qiáng)效果監(jiān)測(cè),防止再污染。

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三、消毒、滅菌的方法

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(一)物理消毒滅菌法

利用物理因子殺滅微生物的方法。包括熱力消毒滅菌、輻射消毒、空氣凈化、超聲波消毒和微波消毒等。

1.熱力消毒滅菌

高溫能使微生物的蛋白質(zhì)和酶變性或凝固(結(jié)構(gòu)改變導(dǎo)致功能喪失),新陳代謝受到障礙而死亡,從而達(dá)到消毒與滅菌的目的。在消毒中,熱可分為濕熱與干熱兩大類。

 

2.干熱消毒滅菌

干熱是指相對(duì)濕度在20%以下的高熱。干熱消毒滅菌是由空氣導(dǎo)熱,傳熱效果較慢。一般繁殖體在干熱80-100℃中經(jīng)1小時(shí)可以殺死,芽胞需160-170℃經(jīng)2小時(shí)方可殺死。

(1)燃燒法 是一種簡(jiǎn)單、迅速、徹底的滅菌方法,因?qū)ξ锲返钠茐男源?,故?yīng)用范圍有限。

燒灼法:一些耐高溫的器械(金屬、搪瓷類),在急用或無條件用其他方法消毒時(shí)可采用此法。將器械放在火焰上燒灼1-2分鐘。若為搪瓷容器,可倒少量95%乙醇,慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)容器,使乙醇分布均勻,點(diǎn)火燃燒至熄滅約1-2分鐘。采集作細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本時(shí),在留取標(biāo)本前后(即啟蓋后,閉蓋前)都應(yīng)將試管(瓶)口和蓋子置于火焰上燒灼,來回旋轉(zhuǎn)2-3次。

燃燒時(shí)要注意安全,須遠(yuǎn)離易燃易爆物品,如氧氣、汽油、乙醚等。燃燒過程不得添加乙醇,以免引起火焰上竄而致灼傷或火災(zāi)。銳利刀剪為保護(hù)刀鋒,不宜用燃燒滅菌法。

焚燒:某些特殊感染,如破傷風(fēng)、氣性壞疽、綠膿桿菌感染的敷料,以及其它已污染且無保留價(jià)值的物品,如污紙、垃圾等,應(yīng)放入焚燒爐內(nèi)焚燒,使之炭化。

 

(2)干烤法

 電熱培養(yǎng)箱:利用培養(yǎng)箱的熱空氣消毒滅菌。培養(yǎng)箱通電加熱后的空氣在一定空間不斷對(duì)流,產(chǎn)生均一效應(yīng)的熱空氣直接穿透物體。一般繁殖體在干熱80-100℃中經(jīng)1小時(shí)可以殺死,芽胞、病毒需160-170℃經(jīng)2小時(shí)方可殺死。熱空氣消毒滅菌法適用于玻璃器皿、瓷器以及明膠海棉、液體石臘、各種粉劑等。滅菌后待箱內(nèi)溫度降至50-40℃以下才能開啟柜門,以防炸裂。

微波消毒:微波是一種高頻電磁波,其殺菌的作用原理,一為熱效應(yīng),所及之處產(chǎn)生分子內(nèi)部劇烈運(yùn)動(dòng),使物體里外濕度迅速升高;一為綜合效應(yīng),諸如化學(xué)效應(yīng)、電磁共振效應(yīng)和場(chǎng)致力效應(yīng)。目前已廣泛應(yīng)用于食品、藥品的消毒,用微波滅菌手術(shù)器械包、微生物實(shí)驗(yàn)室用品等亦有報(bào)告。若物品先經(jīng)1%過氧乙酸或0.5%新潔爾滅濕化處理后,可起協(xié)同殺菌作用,照射2分鐘,可使殺芽胞率由98.81%增加到99.98%-99.99%。  

微波對(duì)人體有一定危害性,其熱效應(yīng)可損傷睪丸、眼睛晶狀體等,長(zhǎng)時(shí)間照射還可致神經(jīng)功能紊亂。使用時(shí)可設(shè)置不透微波的金屬屏障或戴特制防護(hù)眼境等。

 

3.濕熱消毒滅菌

濕熱消毒滅菌是由空氣和水蒸氣導(dǎo)熱,傳熱快,穿透力強(qiáng),濕熱滅菌法比干熱滅菌法所需溫度低、時(shí)間短。

(1)煮沸法 將水煮沸至100℃,保持5-10分鐘可殺滅繁殖體,保持1-3小時(shí)可殺滅芽胞。在水中加入碳酸氫鈉至1%-2%濃度時(shí),沸點(diǎn)可達(dá)105℃,能增強(qiáng)殺菌作用,還可去污防銹。在高原地區(qū)氣壓低、沸點(diǎn)低的情況下,要延長(zhǎng)消毒時(shí)間(海拔每增高300m,需延長(zhǎng)消毒時(shí)間2分鐘)。此法適用于不怕潮濕耐高溫的搪瓷、金屬、玻璃、橡膠類物品。

煮沸前物品涮洗干凈,打開軸節(jié)或蓋子,將其全部浸入水中。大小相同的碗、盆等均不能重疊,以確保物品各面與水接觸。銳利、細(xì)小、易損物品用紗布包裹,以免撞擊或散落。玻璃、搪瓷類放入冷水或溫水中煮;金屬、橡膠類則待水沸后放入。消毒時(shí)間均從水沸后開始計(jì)時(shí)。若中途再加入物品,則重新計(jì)時(shí),消毒后及時(shí)取出物品,保持其無菌狀態(tài)。

 

(2)高壓蒸汽滅菌法  高壓蒸汽滅菌器裝置嚴(yán)密,輸入蒸汽不外逸,溫度隨蒸汽壓力增高而升高,當(dāng)壓力增至103-206kPa時(shí),濕度可達(dá)121.3-132℃。高壓蒸汽滅菌法就是利用高壓和高熱釋放的潛熱進(jìn)行滅菌,為目前可靠而有效的滅菌方法。適用于耐高溫、高壓,不怕潮濕的物品,如敷料、手術(shù)器械、藥品、細(xì)菌培養(yǎng)基等。

潛熱是指當(dāng)lg100℃的水蒸汽變成lg100℃水時(shí),釋放出2255.2J的熱量。

高壓蒸汽滅菌的關(guān)鍵問題是為熱的傳導(dǎo)提供良好條件,而其中最重要的是使冷空氣從滅菌器中順利排出。因?yàn)槔淇諝鈱?dǎo)熱性差,阻礙蒸汽接觸欲滅菌物品,并且還可減低蒸汽分壓使之不能達(dá)到應(yīng)有的溫度。

手提式高壓蒸汽滅菌器:為金屬圓筒,分為二層,隔層內(nèi)盛水,有蓋,可以旋緊,加熱后產(chǎn)生蒸汽。鍋外有壓力表,當(dāng)蒸汽壓力升高時(shí),溫度也隨之相應(yīng)升高。該滅菌器體積小,可自發(fā)蒸汽,便于攜帶。

 操作方法如下:在滅菌器中盛水3000ml;將擬滅菌的物品隨同盛裝的桶放入滅菌器內(nèi);將蓋子上的排氣軟管插于鋁桶內(nèi)壁的的方管中;蓋好蓋子,擰緊元寶螺絲,勿使漏氣;鍋下加熱,打開排氣活門,放出冷空氣(一般在水沸后排氣10-15分鐘左右),關(guān)閉放氣活門,使壓力逐漸上升至103kPa,溫度達(dá)121.3℃,維持20分鐘后,排氣至“0”時(shí),慢慢打開蓋子。如果突然開蓋,冷空氣大量進(jìn)入,蒸汽凝成水滴,使物品潮濕,且玻璃類易發(fā)生爆裂。后再關(guān)閉放氣開關(guān),待夾層壓力表達(dá)到滅菌所需壓力時(shí)(約10分鐘后),將蒸汽控制閥移至“消毒”位置,使蒸汽進(jìn)入柜室 ,柜室內(nèi)的冷空氣及冷凝水可由柜室阻氣器排出,待柜室的壓力升到103-137kPa,溫度達(dá)121.3~126.2℃時(shí),轉(zhuǎn)動(dòng)壓力調(diào)節(jié)閥,使壓力與溫度保持恒定。維持30分鐘后,將蒸汽控制閥移至“排氣”位置,排氣畢,將蒸汽控制閥移至“干燥”位置;物品干燥后,將蒸氣控制閥移至“關(guān)閉”位置,待壓力指針到“0”位置和熱空氣排盡后,才能打開柜門,取出物品;關(guān)緊進(jìn)氣閥。  

臥式高壓蒸汽滅菌器:其結(jié)構(gòu)原理同手提式高壓蒸汽滅菌器,因其體積大,一次可滅菌大量物品。操作人員須經(jīng)專業(yè)培訓(xùn),合格后方能上崗。

預(yù)真空式高壓蒸汽滅菌器:在通入蒸汽前有一預(yù)處理階段,即柜室內(nèi)抽負(fù)壓至2.6kPa(空氣排除約98%),所以,預(yù)真空高壓蒸汽滅菌器除有下排氣式所具備的滅菌系統(tǒng)、蒸汽輸送系統(tǒng)、控制系統(tǒng)、安全系統(tǒng)和儀表監(jiān)測(cè)指示系統(tǒng)外,增加抽負(fù)壓系統(tǒng)和空氣過濾系統(tǒng)。機(jī)器運(yùn)轉(zhuǎn)由電腦控制。


4.紫外線消毒

在室溫20℃~25℃時(shí),220V  30W紫外燈下方垂直位置1.0m處的253.7nm紫外線輻射強(qiáng)度應(yīng)70W/cm2,低于此值時(shí)應(yīng)更換,適當(dāng)數(shù)量的紫外燈,確保平均每立方米應(yīng)不少于1.5W。紫外線消毒時(shí),無菌室內(nèi)應(yīng)保持清潔干燥。在無人條件下,可采取紫外線消毒,作用時(shí)間應(yīng)30min,室內(nèi)濕度20%或40%、相對(duì)濕度大于60%時(shí),應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)照射時(shí)間。用紫外線消毒物品表面時(shí),應(yīng)使照射表面受到紫外線的直接照射,且應(yīng)達(dá)到足夠的照射劑量。人員在關(guān)閉紫外燈至少30min后方可入內(nèi)作業(yè)。

 

5.臭氧消毒

封閉無菌室內(nèi),無人條件下,采用20mg/m3濃度的臭氧,作用時(shí)間應(yīng)30min。消毒后室內(nèi)臭氧濃度0.2mg/m3時(shí)方可入內(nèi)作業(yè)。

(二)化學(xué)試劑消毒

(1)甲醛消毒:按照甲醛(40%)10毫升/立方米、高錳酸鉀5克/立方米計(jì)算用量。不同情況下,用量有所不同,但比例為2:1。盛藥容器要大、耐熱、耐腐蝕:一般用陶瓷或玻璃容器,因?yàn)楦咤i酸鉀和甲醛都具有腐蝕性,且混合后反應(yīng)劇烈,釋放熱量。房間要密閉:這樣熏蒸效果才會(huì)好。容器應(yīng)盡量靠近門,以便操作人員迅速撤離;先將溫水倒入容器內(nèi),后加入高錳酸鉀,攪拌均勻;再加入甲醛;加入甲醛后人立即離開,密閉房間。注意順序:是將甲醛倒入高錳酸鉀溶液內(nèi)。消毒時(shí)間一般為20-30分鐘。消毒后要打開門窗通風(fēng)換氣。

這里說的甲醛就是40%的甲醛溶液,也就是福爾馬林,一般包裝上寫的是37%。缺點(diǎn):甲醛對(duì)人體危害太大了,一般不推薦這種方法。

可以考慮用40%乳酸熏蒸,效果很不錯(cuò)的。

 

(2)乳酸重蒸法消毒:室內(nèi)溫度22 ℃,濕度75%~90%,按0.6 g/m3乳酸量共用9.6 g進(jìn)行室內(nèi)熏蒸,使蒸汽彌散全室,密閉門窗1 h。

附表:常見三種消毒方法的結(jié)果比較


注:Ⅰ乳酸熏蒸法;Ⅱ紫外線滅菌法;Ⅲ臭氧消毒法。

結(jié)果作方差分析,乳酸熏蒸法、臭氧消毒法與紫外線滅菌法差異均有顯著性(P<0.05),乳酸熏蒸法與臭氧消毒法差異無顯著性(P>0.05)。

 

 

 
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