CRISPR/Cas是一套最早在細菌中發(fā)現(xiàn)的由RNA引導的DNA內(nèi)切酶系統(tǒng)。
2013年，CRISPR/Cas系統(tǒng)被證實能夠在哺乳動物細胞中進行高效基因編輯。
目前，利用來自化膿性鏈球菌（Streptococcus pyogenes）的CRISPR/Cas9系統(tǒng)進行基因敲除已成為基因功能研究的重要手段。
此外，CRISPR/Cas9系統(tǒng)在新藥研發(fā)、細胞治療和生物生產(chǎn)等領(lǐng)域也在發(fā)揮越來越重要的作用。
Tip：什么是CRISPR/Cas9系統(tǒng)？
CRISPR/Cas9系統(tǒng)主要由gRNA（guide RNA）和Cas9蛋白兩部分組成。特異性的gRNA與Cas9蛋白在細胞體內(nèi)形成核糖核蛋白復合體（Ribonucleoprotein，RNP），通過特異性的gRNA與基因組特定位點DNA的互補序列結(jié)合，引導Cas9蛋白切割DNA雙鏈，造成DNA雙鏈的斷裂（double-strand break，DSB）。
細胞利用體內(nèi)自身的DNA修復途徑進行DSB的修復。DNA修復途徑主要有非同源末端連接（non-homologous end joining，NHEJ）和同源定向修復（homology-directed repair，HDR）兩種途徑。
在真核細胞中，DSB主要是通過NHEJ途徑進行修復，這是一種非精確修復的方式，通常會導致在斷裂位點插入或刪除核苷酸（insertions or deletions，Indels）。當基因編碼區(qū)產(chǎn)生的Indels為非三整數(shù)倍時，就會導致基因開放閱讀框（open reading frames，ORFs）移碼突變（frameshifts），從而破壞或改變基因功能。
從2013年首次宣布CRISPR/CAS9系統(tǒng)可以應(yīng)用于哺乳動物開始，CRISPR技術(shù)正在基因編輯領(lǐng)域掀起一場新的革命，但在臨床轉(zhuǎn)化中仍面臨著多樣的技術(shù)瓶頸挑戰(zhàn)：
1.基因編輯效率 2.特異性 3.遞送手段
為幫助研究者輕松高效地完成細胞基因敲除實驗，耐思重磅推出Quick-KO®基因敲除試劑盒。Quick-KO®基因敲除試劑盒是一款即用型基因敲除試劑盒，針對人、小鼠等的編碼基因，采用預(yù)設(shè)計方案，提供基因敲除實驗過程中所需的關(guān)鍵試劑。
試劑盒原理
TracrRNA-crRNA在被融合為單鏈向?qū)NA（即sgRNA）時用來指導Cas9作用。針對目的基因，通過人工設(shè)計的sgRNA（small guide RNA, sgRNA）來識別目的基因序列，并引導Cas9蛋白酶進行有效切割DNA雙鏈，形成DNA的雙鏈斷裂。在通常情況下，細胞會采用高效的非同源末端連接方式（Non-homologous End Joining, NHEJ）對斷裂的DNA進行修復。但是，在修復過程中通常會發(fā)生堿基插入或缺失的錯配現(xiàn)象，造成移碼突變，使靶標基因失去功能，從而實現(xiàn)基因敲除。
試劑盒優(yōu)勢
- 即用型試劑、簡化操作
NEST 基因敲除試劑盒包含已構(gòu)建好的表達sgRNA和Cas9的質(zhì)粒（或慢病毒）及基因型鑒定引物，客戶可以直接使用，簡單上手。
- 兩種標記、靈活選擇
NEST 基因敲除試劑盒內(nèi)含sgRNA帶有熒光（mCherry）和藥篩（puro）雙重標記，用戶可以根據(jù)需要自行選擇。
熒光標記便于使用流式細胞術(shù)對轉(zhuǎn)染細胞進行分選，對于使用流式不便的用戶，可使用藥篩標記，避免流式分選，方便后續(xù)實驗。
- 節(jié)省時間、縮短周期
NEST 基因敲除試劑盒是一款高效的基因編輯產(chǎn)品，在提高實驗成功率的同時，縮短了實驗的周期、降低經(jīng)濟成本，為后續(xù)科研奠定下良好基礎(chǔ)。
耐思深耕醫(yī)療器械和生命科學領(lǐng)域高品質(zhì)實驗室耗材領(lǐng)域。在生命制藥行業(yè)中圍繞核酸提取與純化、PCR/RT-PCR、實驗室、基因敲除等方面成功構(gòu)建了完善、成熟的自主產(chǎn)品開發(fā)體系，為客戶提供一體化解決方案，為全球生命科學領(lǐng)域的研究與發(fā)展提供高質(zhì)工具。
