別名:Alkaline Phosphatase Assay Kit
摘要
堿性磷酸酶的活性檢測試劑盒。常用于檢測培養(yǎng)的成骨細(xì)胞、實驗動物血清和骨組織中的堿性磷酸酶活性。
堿性磷酸酶(ALP)廣泛分布于肝臟、骨、小腸之中。特別在骨代謝研究領(lǐng)域方面被用作為骨形成指標(biāo)之一。本品是用p–硝基苯磷酸作為底物的堿性磷酸酶檢測試劑盒,利用微孔板,可進(jìn)行多種樣品的檢測。
【檢測原理】
樣品在含有p-硝基苯磷酸的碳酸鹽緩沖液(pH9.8)中反應(yīng),在樣品中的堿性磷酸酶作用下,p-硝基苯磷酸分解為p-硝基酚和磷酸。生成的p-硝基酚為堿性,呈黃色。根據(jù)測量其405nm的吸光值,計算出樣品中堿性磷酸酶的活性。
■LabAssay TM ALP [p-硝基苯磷酸基質(zhì)法]
【性能】
・檢測范圍:>0.06 mmol/L
・標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍:0~0.5 mmol/L
・再現(xiàn)性:C.V.<10%
【試劑盒組成】
・底物---------------------20片(溶解時:p-硝基苯磷酸二鈉 6.7mmol/L)
・底物溶解液-------100ml×1瓶(2.0mmol/L氯化鎂含有0.1mol/L碳酸鹽緩沖液pH9.8)
・反應(yīng)終止液-------100ml×1瓶(0.2mol/L氫氧化鈉溶液)
・標(biāo)準(zhǔn)液---------------10ml×1瓶(0.5mmol/L p-硝基酚溶液)
【試劑的配制】
1)底物緩沖液:1片底物溶解于5mL底物溶解液中。
2)反應(yīng)終止液:直接使用。
3)系列稀釋標(biāo)準(zhǔn)液:將標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水依次稀釋為0.5、0.25、0.125、0.0625 mmol/L等2倍率稀釋液系列。
【標(biāo)準(zhǔn)操作法】
向96孔微孔板內(nèi)添加100μl底物緩沖液和20μl樣品,在微孔板震蕩器上充分振蕩1分鐘后,37℃孵育15分鐘。
添加80μl反應(yīng)終止液,在微孔板震蕩器上充分振蕩1分鐘后,用酶標(biāo)儀測量405nm處的吸光值
。同樣方法進(jìn)行空白(蒸餾水)對照和標(biāo)準(zhǔn)品的檢測。
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