軟海綿酸相關(guān)應(yīng)用說明

大田軟海綿酸液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法的研究

目的：利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立海產(chǎn)品中大田軟海綿酸(Okadaic acid, OA)的檢測方法。方法：貝樣品提取液經(jīng)AccuBond(上標(biāo) Ⅱ) SPE silica固相萃取小柱預(yù)分離和富集，用三級四極桿串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)作為HPLC的檢測器，使用正離子電噴霧(ESI)電離方式，多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)掃描模式，選擇母→子離子對m/z 827→m/z 723，m/z827→m/z809作為定量檢測的離子對，HPLC的流動相為乙腈：1%甲酸－水（體積比70:30），色譜柱為Agilent Extend-C18(2.1×150mm，Φ5.0μm)，對OA標(biāo)準(zhǔn)品及加標(biāo)樣品和實際樣品進(jìn)行HPLC-MS/MS檢測。結(jié)果：方法線性回歸方程為Y=193.07X-780.6(Q1/Q3：m/z827.4→723.5); Y=83.021X-335.6(Q1/Q3：m/z827.4→509.5)，相關(guān)系數(shù)r^2均為0.9991；線性范圍為10~800μg/L。樣品平均回收率為83.99%，平均RSD為4.34%。結(jié)論：建立的HPLC-MS/MS方法靈敏、快速、準(zhǔn)確，可用于海產(chǎn)品中貝類樣品OA限量標(biāo)準(zhǔn)檢測。

大田軟海綿酸對FL細(xì)胞DNA的損傷及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

本文旨在探討大田軟海綿酸對人羊膜細(xì)胞DNA的損傷及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。實驗用0、20、40、60、80、100nmol/L OA誘導(dǎo)FL細(xì)胞4h后，檢測DNA損傷程度的彗星實驗表明，OA對FL細(xì)胞DNA的損傷隨染毒濃度的升高而增加。蛋白免疫印跡法顯示凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax和p53的表達(dá)與染毒濃度呈負(fù)相關(guān)；用100nmol/L OA分別誘導(dǎo)2h、4h、8h后發(fā)現(xiàn)，三種蛋白的表達(dá)與染毒時間也呈負(fù)相關(guān)。由此可知在OA誘導(dǎo)的FL細(xì)胞凋亡中，損傷DNA，降低Bcl-2蛋白的表達(dá)可能參與了凋亡的部分作用，而Bax和p53蛋白則可能與OA誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖有關(guān)。

抗大田軟海綿酸單克隆抗體的制備、純化及其特性

用大田軟海綿酸與人IgG的偶聯(lián)物OA-IgG作為免疫原，免疫BALB/c小鼠，通過常規(guī)細(xì)胞融合技術(shù)將免疫脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞系SP2/0融合，用間接競爭ELISA方法對融合細(xì)胞所分泌抗體的特異性進(jìn)行篩選。經(jīng)過3次克隆，獲得1株可穩(wěn)定分泌抗OA的雜交瘤細(xì)胞株3C5，其染色體數(shù)為50±2，所分泌杭體屬IgG1亞類，相對分子質(zhì)量是159390，抗體親和常數(shù)為9.8×10^8L/mol，滴度達(dá)2.56×l0^6。

大田軟海綿酸誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制

大田軟海綿酸是一種公認(rèn)的促癌劑，也是腹瀉性貝類毒素的主要成分之一，主要由共生于大田軟海綿和隱瓜海綿中的利馬原甲藻所產(chǎn)生，它在細(xì)胞的生長、分化，代謝和死亡中都起著重要的調(diào)節(jié)作用：現(xiàn)在它已作為一種非常有效的生物工具藥被廣泛用于基礎(chǔ)生命科學(xué)的研究，其中有關(guān)它對不同細(xì)胞株的復(fù)雜凋亡誘導(dǎo)機(jī)制更是得到了普遍的關(guān)注和重視。本文主要概述Fas-FasL，Caspase，Bcl-2和p53等在大田軟海綿酸(okadaic acid, OA)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡機(jī)制中的作用。 
Okadaic acid  25.micro.g
Okadaic acid 50.micro.g
Okadaic acid 100.micro.g
Okadaic acid 1 mg
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