1、 基因敲除與基因敲除小鼠
所謂“基因敲除小鼠、基因敲除模式小鼠“，就是先在小鼠的胚胎干細(xì)胞上通過基因重組的辦法進行基因修飾——將胚胎干細(xì)胞中的靶向基因改掉，然后將“修飾”后的胚胎干細(xì)胞植入小鼠的早期胚胎，生成嵌合體小鼠-基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠。這種嵌合體小鼠——基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠長大后，體內(nèi)同時存在被“修飾”過的基因和未被“修飾”的基因。當(dāng)小鼠的生殖細(xì)胞恰巧被“修飾”過了，則它們就會生出基因完全被“修飾”過的基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠。
基因敲除（Gene knock-out），是建立在基因同源重組技術(shù)以及胚胎干細(xì)胞技術(shù)基礎(chǔ)上的一種新分子生物學(xué)技術(shù)?；蚯贸夹g(shù)是對一個結(jié)構(gòu)已知但功能未知的基因，從分子水平上設(shè)計實驗，將該基因去除，或用其它順序相近基因取代，然后從整體觀察實驗動物，推測相應(yīng)基因的功能的一種技術(shù)。它克服了隨機整合的盲目性和偶然性，是一種理想的修飾、改造生物遺傳物質(zhì)的方法。這項技術(shù)的誕生可以說是分子生物學(xué)技術(shù)上繼轉(zhuǎn)基因技術(shù)后的又一革命。尤其是條件性、誘導(dǎo)性基因打靶系統(tǒng)的建立，使得對基因靶位時間和空間上的操作更加明確、效果更加精確、可靠，它的發(fā)展將為發(fā)育生物學(xué)、分子遺傳學(xué)、免疫學(xué)及醫(yī)學(xué)等學(xué)科提供了一個全新的、強有力的研究、治療手段，具有廣泛的應(yīng)用前景和商業(yè)價值。
基因敲除除可中止某一基因的表達外，還包括引入新基因及引入定點突變。既可以是用突變基因或其它基因敲除相應(yīng)的正?；颍部梢杂谜；蚯贸鄳?yīng)的突變基因。
2、北京百奧賽圖基因生物技術(shù)有限公司基因敲除模式小鼠制備技術(shù)
3.1打靶載體的構(gòu)建
1.打靶載體的設(shè)計及構(gòu)建：打靶載體的設(shè)計及構(gòu)建是基因敲除小鼠、基因敲除模式小鼠開發(fā)的第一步。是把目的基因和與細(xì)胞內(nèi)靶基因特異片段同源的DNA分子都重組到帶有標(biāo)記基因(如neo基因，TK基因等)的載體上，此重組載體即為打靶載體。因設(shè)計與開發(fā)基因敲除小鼠、基因敲除模式小鼠目的不同，此載體有不同的設(shè)計方法，可分為替換性載體和插入型載體。如為了把某一外源基因引入染色體DNA的某一位點上，這種情況下應(yīng)設(shè)計的插入型載體要包括外源基因(即目的基因)、同源基因片段及標(biāo)記基因等部分。如為了使某一基因失去其生理功能，這時所要設(shè)計的替換型打靶載體，應(yīng)包括含有此靶基因的啟動子及第一外顯子的DNA片段及標(biāo)記基因等諸成分。此外，還要對Southern轉(zhuǎn)染探針進行設(shè)計、構(gòu)建、預(yù)實驗及優(yōu)化等。
北京百奧賽圖基因生物技術(shù)有限公司具有獨特的、用于大片段DNA分子克隆技術(shù)并優(yōu)化了一套獨特的打靶載體構(gòu)建技術(shù)，該技術(shù)可以大大地提高打靶載體構(gòu)建速度，減少突變，同時易于胚胎干細(xì)胞重組和篩選等多重優(yōu)點。使得公司的基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠模型構(gòu)建速度大大加快。
3.2胚胎干細(xì)胞的電轉(zhuǎn)和培養(yǎng)
小鼠胚胎干細(xì)胞（Embryonic stemcell, ESC）是基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠制的關(guān)鍵材料。目前市場上供應(yīng)的ES細(xì)胞通常質(zhì)量很不穩(wěn)定，或是同源重組效率不高，或是不容易進入種系傳代，難于滿足制備基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠的要求。實驗室需要對ES細(xì)胞進行系統(tǒng)的研究試驗，才能找到重組率高，易傳代的ES細(xì)胞。我們公司自己研發(fā)并篩選C57BL/6遺傳背景的小鼠胚胎干細(xì)胞，所以可以直接得到C57BL/近交系模式小鼠，省去用129背景小鼠所需要的超過2年的回交時間。
將基因打靶載體通過電穿孔法導(dǎo)入同源的C57BL/6胚胎干細(xì)胞中，使外源DNA與胚胎干細(xì)胞基因組中相應(yīng)部分發(fā)生同源重組，將打靶載體中的DNA序列整合到內(nèi)源基因組中從而得以表達?？梢詷O大地縮短科研時間（7-9個月，節(jié)約一半的時間），節(jié)省資金，及提高科研的競爭力。由于其遺傳背景清晰，容易獲得重復(fù)性好的實驗結(jié)果。

　3.3陽性克隆的挑取和篩選：用選擇性培養(yǎng)基篩選已擊中的細(xì)胞：一般地，篩選使用正、負(fù)選擇法，比如用G418篩選所有能表達neo基因的細(xì)胞，然后用Ganciclovir淘汰所有HSV-TK正常表達的細(xì)胞，剩下的細(xì)胞為命中的細(xì)胞。將篩選出來的靶細(xì)胞導(dǎo)入鼠的囊胚中，再將此囊胚植人假孕母鼠體內(nèi)，使其發(fā)育成嵌合體小鼠。
3.4通過觀察基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠的生物學(xué)形狀的變化進而了解目的基因變化前后對小鼠的生物學(xué)形狀的改變，達到研究目的基因的目的?；蚯贸∈?，基因敲除模式小鼠已經(jīng)成為國內(nèi)外科研機構(gòu)、醫(yī)藥企業(yè)、醫(yī)院進行基礎(chǔ)研究的重要工具。